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枯草芽孢桿菌表達(dá)人源蛋白的問題
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| 小妹最近在做枯草芽孢桿菌表達(dá)人來源的重組蛋白，發(fā)現(xiàn)很多蛋白都不表達(dá)，或者表達(dá)的非常不好。WESTERN可以檢測(cè)，SDS-PAGE看不到。而芽孢自身來源的重組蛋白表達(dá)卻不錯(cuò)。但是我的最終目的就是用來表達(dá)人源蛋白的。請(qǐng)問做重組蛋白表達(dá)的話，枯草芽孢桿菌適合表達(dá)什么蛋白呢？ |
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5樓2014-06-26 21:29:29
huangrui1988 
銅蟲 (小有名氣)
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xissy(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-06-25 08:33:43
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| 是這樣的，首先選擇菌株很重要，WB800敲除了多個(gè)蛋白酶，可能對(duì)你更加合適。其次，你要選擇合適的信號(hào)肽來分泌你的蛋白，wb可以檢測(cè)，說明已經(jīng)分泌了，你可以看看有沒有活性。SDS page的靈敏度肯定沒有WB高啊，這個(gè)·很正常，一般都要濃縮的，工業(yè)上也要高密度發(fā)酵的啊，接著分泌水平基本上有10-50倍的提高，所以不用擔(dān)心。自身來源的蛋白不錯(cuò)，有多不錯(cuò)？g/l?你自己做的數(shù)據(jù)是？枯草芽孢桿菌表達(dá)大宗酶類，如淀粉酶效果不錯(cuò)，可以有25-30g/l |
2樓2014-06-24 15:56:09
penfour
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3樓2014-06-25 16:17:43
4樓2014-06-25 16:47:49
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