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枯草芽孢桿菌表達人源蛋白的問題
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| 小妹最近在做枯草芽孢桿菌表達人來源的重組蛋白，發(fā)現(xiàn)很多蛋白都不表達，或者表達的非常不好。WESTERN可以檢測，SDS-PAGE看不到。而芽孢自身來源的重組蛋白表達卻不錯。但是我的最終目的就是用來表達人源蛋白的。請問做重組蛋白表達的話，枯草芽孢桿菌適合表達什么蛋白呢？ |
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4樓2014-06-25 16:47:49
huangrui1988 
銅蟲 (小有名氣)
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| 是這樣的，首先選擇菌株很重要，WB800敲除了多個蛋白酶，可能對你更加合適。其次，你要選擇合適的信號肽來分泌你的蛋白，wb可以檢測，說明已經(jīng)分泌了，你可以看看有沒有活性。SDS page的靈敏度肯定沒有WB高啊，這個·很正常，一般都要濃縮的，工業(yè)上也要高密度發(fā)酵的啊，接著分泌水平基本上有10-50倍的提高，所以不用擔(dān)心。自身來源的蛋白不錯，有多不錯？g/l?你自己做的數(shù)據(jù)是？枯草芽孢桿菌表達大宗酶類，如淀粉酶效果不錯，可以有25-30g/l |
2樓2014-06-24 15:56:09
penfour
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