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海豚的預(yù)言金蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于Dam甲基化和Dpn1的酶切問題
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我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)發(fā)卡型DNA,一端標(biāo)記熒光基團(tuán),加入GO可以猝滅其熒光,加入Dam進(jìn)行甲基化Dpn1酶切,進(jìn)而標(biāo)記有熒光基團(tuán)的短鏈脫落,熒光得到恢復(fù)。 問題是,我做了好幾次,熒光恢復(fù)很弱,不知道是哪里出了問題,請(qǐng)求各位大神幫忙指點(diǎn)一下: DNA 2μM,5μL + SAM 0.8μM,1μL +Dam 0.8U/μL,2μL + Dpn1 8U 共計(jì)10μL,在1×Dam的buffer里37℃下反應(yīng)兩小時(shí),加入GO,室溫反應(yīng)15分鐘后檢測(cè) |
新蟲 (初入文壇)
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