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海豚的預(yù)言

金蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 2205.8
帖子: 14
在線: 36.7小時(shí)
蟲號(hào): 1800145
注冊(cè): 2012-05-07
專業(yè): 生化分析及生物傳感

[求助] 關(guān)于Dam甲基化和Dpn1的酶切問(wèn)題

我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)發(fā)卡型DNA，一端標(biāo)記熒光基團(tuán)，加入GO可以猝滅其熒光，加入Dam進(jìn)行甲基化Dpn1酶切，進(jìn)而標(biāo)記有熒光基團(tuán)的短鏈脫落，熒光得到恢復(fù)。
問(wèn)題是，我做了好幾次，熒光恢復(fù)很弱，不知道是哪里出了問(wèn)題，請(qǐng)求各位大神幫忙指點(diǎn)一下：
DNA 2μM,5μL + SAM 0.8μM,1μL +Dam 0.8U/μL,2μL + Dpn1 8U 共計(jì)10μL，在1×Dam的buffer里37℃下反應(yīng)兩小時(shí)，加入GO，室溫反應(yīng)15分鐘后檢測(cè)

回復(fù)此樓

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【求助/交流】定點(diǎn)突變PCR后加DPN1酶的作用已經(jīng)有4人回復(fù)

1樓 2014-06-25 09:43:27

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只是背影

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 0.5
帖子: 14
在線: 20.8小時(shí)
蟲號(hào): 3797471
注冊(cè): 2015-04-09
性別: GG
專業(yè): 無(wú)機(jī)非金屬類光電信息與功

想請(qǐng)教一下，幾個(gè)問(wèn)題：
發(fā)夾型DNA的高溫退化純化中你是用的什么buffer呢？
你的Dam buffer是什么成分呢，是購(gòu)買Dam MTase自帶的buffer，還是自己配制的？
就是感覺(jué)這幾個(gè)步驟（發(fā)夾結(jié)構(gòu)的純化、甲基化、剪切）所用的buffer都不一樣，不知道樓主是怎么安排或設(shè)計(jì)的？

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回復(fù)此樓

2樓2017-05-10 15:50:43

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