帶鎖的季節(jié)

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[求助] 兩段ＤＮＡ鏈如何合成一條鏈？已有1人參與

轉(zhuǎn)錄是以ＤＮＡ有義鏈為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的，可有義鏈不會(huì)只在一條鏈上，我現(xiàn)在想把兩段ＤＮＡ鏈（各自都帶ＡＴＧ）合為一條且起始密碼子能正確翻譯成Ｍ，那么這兩條應(yīng)該怎樣連接？？？是ＡＴＧ鏈連著ＡＴＧ還是ＡＴＧ連著ＴＡＣ？？？？？？

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1樓 2014-06-25 10:19:51

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帶鎖的季節(jié)(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-25 13:31:26

把你這個(gè)問(wèn)題簡(jiǎn)化為：
你現(xiàn)在有DNA A片段和B片段，你現(xiàn)在想把A和B fusion起來(lái)，最簡(jiǎn)單的方法就是設(shè)計(jì)引物做Overlap PCR，具體Overlap的做法，論壇里面有很多帖子，自己搜搜

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2樓2014-06-25 10:36:48

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引用回帖:

2樓: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 10:36:48
把你這個(gè)問(wèn)題簡(jiǎn)化為：
你現(xiàn)在有DNA A片段和B片段，你現(xiàn)在想把A和B fusion起來(lái)，最簡(jiǎn)單的方法就是設(shè)計(jì)引物做Overlap PCR，具體Overlap的做法，論壇里面有很多帖子，自己搜搜

在A和B之間有一個(gè)共同酶切位點(diǎn)，我可以把它連起來(lái)，可是我不知道的是A和B直接連還是A與B互補(bǔ)鏈連，這兩種連接方式哪一種能使我的兩個(gè)ATG均能正確翻譯成M

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3樓2014-06-25 11:15:01

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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-25 13:31:40
帶鎖的季節(jié): 金幣+3, ★有幫助 2014-06-26 08:52:52

引用回帖:

3樓: Originally posted by 帶鎖的季節(jié) at 2014-06-25 11:15:01
在A和B之間有一個(gè)共同酶切位點(diǎn)，我可以把它連起來(lái)，可是我不知道的是A和B直接連還是A與B互補(bǔ)鏈連，這兩種連接方式哪一種能使我的兩個(gè)ATG均能正確翻譯成M...

不知道你的基因是在同一條DNA鏈上，還是在DNA的兩條鏈上，總之就是將有義鏈連接在一起，在A和B之間有一個(gè)共同酶切位點(diǎn)的話，是可以連接起來(lái)的，連接的時(shí)候要考慮讀碼框的問(wèn)題

不知道你是真核的還是原核的

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4樓2014-06-25 12:14:52

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4樓: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 12:14:52
不知道你的基因是在同一條DNA鏈上，還是在DNA的兩條鏈上，總之就是將有義鏈連接在一起，在A和B之間有一個(gè)共同酶切位點(diǎn)的話，是可以連接起來(lái)的，連接的時(shí)候要考慮讀碼框的問(wèn)題

不知道你是真核的還是原核的...

其實(shí)就是您說(shuō)的有義鏈的問(wèn)題，我不知道應(yīng)該放在一條DNA鏈上還是兩條DNA上，做的是真核，我是不是應(yīng)該把這兩段放在一條鏈上就行是嗎

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5樓2014-06-25 13:55:10

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-06-25 19:33:37

可以用PCR方法，先設(shè)計(jì)引物，然后PCR擴(kuò)增，跑電泳，切割電泳膠，然后做純化就好了。

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6樓2014-06-25 17:18:37

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引用回帖:

5樓: Originally posted by 帶鎖的季節(jié) at 2014-06-25 13:55:10
其實(shí)就是您說(shuō)的有義鏈的問(wèn)題，我不知道應(yīng)該放在一條DNA鏈上還是兩條DNA上，做的是真核，我是不是應(yīng)該把這兩段放在一條鏈上就行是嗎...

當(dāng)然是放在一條鏈上啊，不是共用一個(gè)啟動(dòng)子嗎，你兩段序列都是放在同一啟動(dòng)子的下游啊

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7樓2014-06-25 19:34:33

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7樓: Originally posted by gyesang at 2014-06-25 19:34:33
當(dāng)然是放在一條鏈上啊，不是共用一個(gè)啟動(dòng)子嗎，你兩段序列都是放在同一啟動(dòng)子的下游啊...

謝謝，好像懂了些

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8樓2014-06-26 08:54:27

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-15 12:36:02

用重疊延伸PCR可以連接。

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9樓2014-06-28 16:07:04

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