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沙伯略捐助貴賓 (正式寫手)
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[求助]
Transwell做熒光黃等標(biāo)記物測量Papp值時(shí)，能用PBS代替HBSS嗎？ 已有2人參與
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各位蟲友：我的實(shí)驗(yàn)是將Caco-2細(xì)胞接種到Transwell上，培養(yǎng)21天，期間測量跨膜電阻抗值（TEER），建立腸上皮緊密連接模型。到達(dá)18-23天左右，TEER值約為600-800Ω（而在第13天TEER達(dá)到最大值1800Ω，之后，逐漸下降，到21天，TEER下降到600-1000Ω，此時(shí)做了熒光黃通透性實(shí)驗(yàn)），現(xiàn)欲驗(yàn)證緊密連接的完整性，故利用熒光黃來檢測表觀通透性（Papp）。Transwell上室加0.5ml的200ug/ml熒光黃（PBS為溶劑），下室加1.5mlPBS，培養(yǎng)箱中孵育1h后，在下室取樣1ml，利用熒光分光光度計(jì)推算透過Transwell的熒光黃濃度（線性提前已做好，在線性范圍內(nèi)。Papp值剛好在n*10^-6cm/s（n=2,3,4,5,6,7），即papp剛好處在10^-6cm/s數(shù)量級上，并未達(dá)到文獻(xiàn)所述的小于10^-6cm/s的要求。 請問，問題出在哪里呢？ 是緊密連接模型未達(dá)到要求（如前所述，電阻值在13天達(dá)最大值后又逐漸下降）還是因?yàn)橥高^性試驗(yàn)不能用PBS，只能用HBSS?(因?yàn)槲铱吹轿墨I(xiàn)里面一般用HBSS做熒光黃通透性實(shí)驗(yàn))。 敬請各位同道不吝賜教啊~~~  |
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沙伯略
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