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k1040348263金蟲 (正式寫手)
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[求助]
想用色譜定量癌細胞中的DNA，但有好多問題不懂，請各位前輩幫幫忙吧，實驗做不動了
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| 我想破碎癌細胞，然后定量細胞中的DNA濃度�，F(xiàn)在覺得操作有問題，不知得到的DNA是否有損失。首先，我在3000轉(zhuǎn)速（應(yīng)該不屬于小型離心機吧，，個頭還挺大，我也不知離心力多少）下，將細胞離心了10分鐘，拿出后，離心管的下部有少許白色沉淀，我認為是細胞都離心下來了（不知這時細胞破了嗎），然后將培養(yǎng)液吸出，加入了2ml的滅菌水，這時發(fā)現(xiàn)水中出現(xiàn)了白色的東西，是細胞膜嗎？然后我又在100w的功率下超聲了5～6分鐘，這時DNA是不是斷掉了，那蛋白質(zhì)與DNA分開了嗎？我想將DNA酶解成核苷酸，然后進色譜定量，不知蛋白質(zhì)或細胞中的其他東西影響嗎？不知有沒有做過定量細胞中的DNA的，用的什么方法？ |
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 細胞生物學實驗經(jīng)驗 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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k1040348263: 金幣+5, ★★★很有幫助, 非常感謝你，親。 2014-07-03 21:17:56
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今天我是來不及回答你怎么多問題，改日給你一個標準protocol，我現(xiàn)在剛開完會，手里沒有，一會去聚餐。 超聲肯定是能夠粉碎細胞、DNA甚至斷裂肽鍵。 至于蛋白質(zhì)、DNA和其他細胞成分彼此分開和特異性鑒定都有成熟的試驗方法，你可以參考有關(guān)細胞生物學和分子生物學實驗手冊。徹底裂解細胞也可以用SDS。蛋白質(zhì)、DNA都可以用特異性波長的光譜鑒定純度和濃度。 蛋白質(zhì)-DNA形成分子復合體當然會影響DNA酶解，這就是蛋白質(zhì)-DNA相互作用的研究方法保護法或者組激發(fā)的基本原理。 “我想將DNA酶解成核苷酸，然后進色譜定量”--------我不懂你這一部實驗的目的，如果想定量確定DNA，提純DNA之后，用紫外光很易確定其濃度。 問題太多，我改日解答貼資料。 |
2樓2014-07-03 18:47:50
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從這上面選一個實驗方案提取真核細胞的基因組DNA的實驗方案。 分子克隆指南上下冊，第三版PDF http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5864295&fpage=1&target=blank 你這樣設(shè)計實驗沒有任何成功的可能。 |
5樓2014-07-03 23:27:34
k1040348263
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4樓2014-07-03 21:22:48
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