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k1040348263金蟲 (正式寫手)
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[求助]
想用色譜定量癌細(xì)胞中的DNA，但有好多問題不懂，請(qǐng)各位前輩幫幫忙吧，實(shí)驗(yàn)做不動(dòng)了
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| 我想破碎癌細(xì)胞，然后定量細(xì)胞中的DNA濃度。現(xiàn)在覺得操作有問題，不知得到的DNA是否有損失。首先，我在3000轉(zhuǎn)速（應(yīng)該不屬于小型離心機(jī)吧，，個(gè)頭還挺大，我也不知離心力多少）下，將細(xì)胞離心了10分鐘，拿出后，離心管的下部有少許白色沉淀，我認(rèn)為是細(xì)胞都離心下來了（不知這時(shí)細(xì)胞破了嗎），然后將培養(yǎng)液吸出，加入了2ml的滅菌水，這時(shí)發(fā)現(xiàn)水中出現(xiàn)了白色的東西，是細(xì)胞膜嗎？然后我又在100w的功率下超聲了5～6分鐘，這時(shí)DNA是不是斷掉了，那蛋白質(zhì)與DNA分開了嗎？我想將DNA酶解成核苷酸，然后進(jìn)色譜定量，不知蛋白質(zhì)或細(xì)胞中的其他東西影響嗎？不知有沒有做過定量細(xì)胞中的DNA的，用的什么方法？ |
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 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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9樓2014-07-04 10:16:03
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
k1040348263: 金幣+5, ★★★很有幫助, 非常感謝你，親。 2014-07-03 21:17:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
k1040348263: 金幣+5, ★★★很有幫助, 非常感謝你，親。 2014-07-03 21:17:56
今天我是來不及回答你怎么多問題，改日給你一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)protocol，我現(xiàn)在剛開完會(huì)，手里沒有，一會(huì)去聚餐。 超聲肯定是能夠粉碎細(xì)胞、DNA甚至斷裂肽鍵。 至于蛋白質(zhì)、DNA和其他細(xì)胞成分彼此分開和特異性鑒定都有成熟的試驗(yàn)方法，你可以參考有關(guān)細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)。徹底裂解細(xì)胞也可以用SDS。蛋白質(zhì)、DNA都可以用特異性波長(zhǎng)的光譜鑒定純度和濃度。 蛋白質(zhì)-DNA形成分子復(fù)合體當(dāng)然會(huì)影響DNA酶解，這就是蛋白質(zhì)-DNA相互作用的研究方法保護(hù)法或者組激發(fā)的基本原理。 “我想將DNA酶解成核苷酸，然后進(jìn)色譜定量”--------我不懂你這一部實(shí)驗(yàn)的目的，如果想定量確定DNA，提純DNA之后，用紫外光很易確定其濃度。 問題太多，我改日解答貼資料。 |
2樓2014-07-03 18:47:50
k1040348263
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3樓2014-07-03 21:19:34
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4樓2014-07-03 21:22:48
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