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張冰寶新蟲 (小有名氣)
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[求助]
目的片段回收后濃度較低，如何濃縮？ 已有6人參與
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| 我回收了我的目的片段，條帶很暗且稍偏高，濃度有些低，連接表達(dá)載體一直連接不上，希望可以把我的目的片段濃縮一下。不知道該如何濃縮，希望知道的大俠們指點(diǎn)一下 謝謝 |
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張冰寶
新蟲 (小有名氣)
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1.我的表達(dá)載體是5900bp，我是直接就是酶切產(chǎn)物回收的 ，就是怕?lián)p失。 2.這次涂了兩個(gè)平板，自己轉(zhuǎn)化的那個(gè)板沒長，另一個(gè)是商品化的陽性質(zhì)粒，長了滿板�？梢耘懦遄雍透惺軕B(tài)的問題 3.是因?yàn)槲业膬蓚�(gè)酶切位點(diǎn)在載體上非常接近，所以不好辨認(rèn)是否切開，但是我用我同門切好的也是連不上，（我同門連上了）。所以應(yīng)該不是表達(dá)載體的問題。 4.我現(xiàn)在的連接體系是：5微升體系：（基因3ul。載體1ul。T4buffer 0.5ul。T4酶0.5ul） 10微升體系：（基因6ul，載體1ul，buffer1ul，酶1ul，水1ul） 不加水全加基因我也試過，但是也是每長菌。所以我想可能是我的回收片段有問題 |
55樓2014-07-23 08:54:51
for5
木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-07-07 16:19:56
隨風(fēng)飄搖11
木蟲 (著名寫手)
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3樓2014-07-07 23:12:13
4樓2014-07-08 00:00:30
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