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馨-馨銀蟲 (小有名氣)
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連接轉(zhuǎn)化問題 已有6人參與
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各位大神，小妹最近做電轉(zhuǎn)化，平板上一直什么菌都不長，干干凈凈，不知道是什么原因啊。 背景條件: 1. 目的片段是用TAKARA公司的EX Taq 酶通過簡并引物PCR，在通過膠回收純化過后，測(cè)濃度114.99ng/ul，大小約1.5kb。 2.連接體系：takara 公司的T-18-Vector 取0.5ul，上述1中的目的片段取1ul, 3.5ul 無菌水，5ul 的Soultion I ，總體積10ul，16℃連接11h. 3. 10ul 連接體系加入到100ul DH5 α 感受態(tài)細(xì)胞中，電轉(zhuǎn)，2500V。 4.加入600ul LB，37℃搖床1h。 5.倒板：200ul 固體培養(yǎng)基 Amp加 400ul, x-gal 加160ul, IPTG 加80ul. 6.涂板：涂2個(gè)板，每個(gè)300ul。 7.培養(yǎng)：37℃恒溫培養(yǎng)12-16小時(shí)。 8.結(jié)果：培養(yǎng)過后，什么都不長，平板干干凈凈。 |
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10樓2014-07-18 15:04:07
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