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擬南芥核基因編碼蛋白,定位于葉綠體。已知氨基酸序列,怎么找到前導肽? 已有1人參與
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擬南芥數據庫,已知基因編號,里面有很多注釋,但是看不懂。 我想體外表達目的蛋白(核基因編碼,定位于葉綠體),應該用cDNA序列作為模板?但是不知道哪里是起始密碼子,哪里是終止密碼子? 氨基酸序列是否包含定位到葉綠體的前導肽? 為什么氨基酸序列的長度與cDNA的核酸序列長度對不上? 本人是做原核生物的,有很多問題不太清楚,請各位大俠幫助!! |
蛋白質生物學實驗經驗 | 核酸生物學實驗經驗 | 生物信息學 |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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1.體外表達是沒有剪接機制的,要用CDS。 2.我估計你到擬南芥數據庫里下載的cDNA是和RNA對應的序列,這種序列雖然沒有內含子,但是有3‘和5’-UTR,所以長度和氨基酸長度對應不上,你要從這段序列中找到CDS(氨基酸編碼序列)。 3.你可以到NCBI里,拿你的蛋白序列和cDNA序列做比對,用blastx,一下就出結果了;蛘邚3個位置翻譯你的cDNA,總有一個是對的,然后找出起始位點。再或者把基因編號貼出來,論壇里很多人都會找的。 4.網站提供的序列一般都是全長,從起始密碼到終止密碼子,里頭包含了前導肽。 |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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CDS編碼成蛋白后是帶有前導肽的。如果要知道前導肽,最直接并且最有效的辦法就是看看其他人的研究,說不定有人做了相關的研究(照我的經驗一般都不會有人做這類研究的,要運氣很好才能碰到)。大部分人都是利用網站上的一些工具預測前導肽,http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/和http://smart.embl-heidelberg.de/smart/set_mode.cgi?NORMAL=1都可以試試 |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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