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新手關(guān)于貼壁癌細(xì)胞傳代的一些小問題，請(qǐng)教各位高手 已有6人參與
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最近跟著師姐做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，操作太差被訓(xùn)了，想請(qǐng)教下面幾個(gè)問題 1 消化的時(shí)候，師姐告訴我如果消化過了就加多于胰酶量的培養(yǎng)基終止反應(yīng)然后吹打，離心。如果是剛好的話就倒掉胰酶，再加培養(yǎng)基吹打離心。我看了很多網(wǎng)上的說法，有說剛開始細(xì)胞變圓就倒掉胰酶的，但是今天我做的時(shí)候在顯微鏡下看到變圓了，但是是成片的細(xì)胞，師姐說還沒有消化好，再放了30s 結(jié)果就過頭了 2 離心過后的上清液是直接倒到廢液缸還是用吸管吸出啊 3分瓶的時(shí)候需要計(jì)數(shù)嗎 師姐說影響不大，一般濃度是多大啊。我用的是100ml的培養(yǎng)瓶。 4 因?yàn)榻裉觳僮骱芏啾徽f的很慘 師姐帶了我兩個(gè)星期 基本隔天就在細(xì)胞房，我在旁邊看著她操作。前幾天自己換了培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，今天傳代。兩次操作從頭被說到尾，我想問問大家 是不是我真的很笨啊，大家開始的時(shí)候都這樣嗎 |
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相信我，不是你笨，是師姐不是好老師。 培養(yǎng)細(xì)胞是不能再簡(jiǎn)單活了，沒有你師姐說的那么嚴(yán)重。只要不污染其他都是小問題，甚至根本不是問題。一般腫瘤細(xì)胞都很好培養(yǎng)，消化過程也很簡(jiǎn)單，不需要特別在意過不過的問題，即便“過了”，對(duì)細(xì)胞的后續(xù)過程一般也基本沒有影響。當(dāng)然，有些細(xì)胞消化后容易黏在一起，不容易打散，這時(shí)候培養(yǎng)基不要加太多，在小體積條件下更容易些。 同學(xué)別急，也別在意別人說些什么，開始嗎，即便出點(diǎn)什么問題也是正常的，不出問題反倒有些不正常了。否則怎么進(jìn)步呢？ 希望沒有得罪你的師姐。放松心情，好好生活  |
4樓2014-07-21 21:00:57
2樓2014-07-21 15:31:27
3樓2014-07-21 19:53:14
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你師姐沒有很好的教你也是有責(zé)任的。 癌細(xì)胞的培養(yǎng)并不復(fù)雜，消化條件也很寬松，就算過了也沒問題的。反正離心前加培養(yǎng)基是必須的，所以也不用擔(dān)心過不過的問題。培養(yǎng)基中的血清會(huì)終止酶反應(yīng)的。 如果細(xì)胞成片的話也可以用移液槍抽取打散。 離心之后細(xì)胞都會(huì)沉積，上清液直接倒在無菌操作櫥里的廢液缸就可以了。 至于培養(yǎng)基，100ml培養(yǎng)瓶的話，應(yīng)該20ml的培養(yǎng)基就可以了吧，這個(gè)不是特別確定，我大多是用10cm培養(yǎng)皿或T75。 總之不要心急，慢慢來就好，做好無菌操作，不要染菌就不會(huì)有很大問題。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
5樓2014-07-22 03:58:09
6樓2014-07-22 08:59:47
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消化過了，加培養(yǎng)基終止消化這種做法是對(duì)的。什么是消化好了，就是80%的細(xì)胞變圓，彼此分開就可以了，也可以在顯微鏡下看時(shí)左右或上下動(dòng)一動(dòng)，又出現(xiàn)懸浮的，幾乎是消化好了，可以吹打。 離心后的上清液最好是吸出，這樣安全也不易污染。 分瓶的時(shí)候不用計(jì)數(shù)，看你的細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般癌細(xì)胞比較好培養(yǎng)，并且生長(zhǎng)較快，可以少接種一點(diǎn)，少于1ml足夠了。計(jì)數(shù)只有在細(xì)胞鋪板時(shí)才需要的。 細(xì)胞培養(yǎng)需要細(xì)心和耐心，當(dāng)熟練了就好了，其實(shí)很簡(jiǎn)單的。 |
8樓2014-07-22 10:49:38
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| 其實(shí)你只是開始不熟悉細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的操作罷了~ 每個(gè)人剛剛開始接觸細(xì)胞實(shí)驗(yàn)都是這樣的，有人在一旁看著會(huì)比較緊張。貼壁細(xì)胞呢，不管是不是癌細(xì)胞盡量不要消化的太過，那樣對(duì)細(xì)胞會(huì)有損傷的。顯微鏡下看到細(xì)胞變圓，輕輕晃動(dòng)胰酶看到有細(xì)胞（白色的）滑落為宜，就可以吸出胰酶了~ 再用培養(yǎng)基就很容易吹下來的。每種細(xì)胞都有自己的特點(diǎn)，這個(gè)消化時(shí)間還是需要自己多做幾次掌握好度就可以做得很好了。 |
9樓2014-07-22 10:52:12
10樓2014-07-22 11:11:38
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