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[求助]
新手關于貼壁癌細胞傳代的一些小問題，請教各位高手 已有6人參與
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最近跟著師姐做細胞實驗，操作太差被訓了，想請教下面幾個問題 1 消化的時候，師姐告訴我如果消化過了就加多于胰酶量的培養(yǎng)基終止反應然后吹打，離心。如果是剛好的話就倒掉胰酶，再加培養(yǎng)基吹打離心。我看了很多網(wǎng)上的說法，有說剛開始細胞變圓就倒掉胰酶的，但是今天我做的時候在顯微鏡下看到變圓了，但是是成片的細胞，師姐說還沒有消化好，再放了30s 結果就過頭了 2 離心過后的上清液是直接倒到廢液缸還是用吸管吸出啊 3分瓶的時候需要計數(shù)嗎 師姐說影響不大，一般濃度是多大啊。我用的是100ml的培養(yǎng)瓶。 4 因為今天操作很多被說的很慘 師姐帶了我兩個星期 基本隔天就在細胞房，我在旁邊看著她操作。前幾天自己換了培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，今天傳代。兩次操作從頭被說到尾，我想問問大家 是不是我真的很笨啊，大家開始的時候都這樣嗎 |
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相信我，不是你笨，是師姐不是好老師。 培養(yǎng)細胞是不能再簡單活了，沒有你師姐說的那么嚴重。只要不污染其他都是小問題，甚至根本不是問題。一般腫瘤細胞都很好培養(yǎng)，消化過程也很簡單，不需要特別在意過不過的問題，即便“過了”，對細胞的后續(xù)過程一般也基本沒有影響。當然，有些細胞消化后容易黏在一起，不容易打散，這時候培養(yǎng)基不要加太多，在小體積條件下更容易些。 同學別急，也別在意別人說些什么，開始嗎，即便出點什么問題也是正常的，不出問題反倒有些不正常了。否則怎么進步呢？ 希望沒有得罪你的師姐。放松心情，好好生活  |
4樓2014-07-21 21:00:57
2樓2014-07-21 15:31:27
3樓2014-07-21 19:53:14
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你師姐沒有很好的教你也是有責任的。 癌細胞的培養(yǎng)并不復雜，消化條件也很寬松，就算過了也沒問題的。反正離心前加培養(yǎng)基是必須的，所以也不用擔心過不過的問題。培養(yǎng)基中的血清會終止酶反應的。 如果細胞成片的話也可以用移液槍抽取打散。 離心之后細胞都會沉積，上清液直接倒在無菌操作櫥里的廢液缸就可以了。 至于培養(yǎng)基，100ml培養(yǎng)瓶的話，應該20ml的培養(yǎng)基就可以了吧，這個不是特別確定，我大多是用10cm培養(yǎng)皿或T75。 總之不要心急，慢慢來就好，做好無菌操作，不要染菌就不會有很大問題。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
5樓2014-07-22 03:58:09
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| 其實你只是開始不熟悉細胞實驗的操作罷了~ 每個人剛剛開始接觸細胞實驗都是這樣的，有人在一旁看著會比較緊張。貼壁細胞呢，不管是不是癌細胞盡量不要消化的太過，那樣對細胞會有損傷的。顯微鏡下看到細胞變圓，輕輕晃動胰酶看到有細胞（白色的）滑落為宜，就可以吸出胰酶了~ 再用培養(yǎng)基就很容易吹下來的。每種細胞都有自己的特點，這個消化時間還是需要自己多做幾次掌握好度就可以做得很好了。 |
9樓2014-07-22 10:52:12
10樓2014-07-22 11:11:38
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