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linshangyan鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
輪狀病毒RNA提取的原理，能講講各個(gè)步驟的目的么？？？ 已有2人參與
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1.吸取0.25 mlmL供試品，加入加至1.5 mlmL離心管中，再加入0.25 ml mL2%SDS-0.2M醋酸緩沖液，扣上管蓋。用手輕輕顛倒混勻30秒或?qū)⑿郎u振蕩器開到第1檔震蕩30秒。 2.立即加入0.5 mlmL的Tris-飽和酚，扣上管蓋。用手輕輕顛倒混勻30秒。 3.用臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心，設(shè)定轉(zhuǎn)速為10000 rpm，離心時(shí)間5 min分鐘。離心時(shí)溫度最好不要高于10℃。 4.離心后樣品溶液呈三層，用槍頭吸出最上層的上清液，約400 μlL。注意不要吸到中間的蛋白層。 5.將上清液放入離心管中，加入800 μlL低溫?zé)o水乙醇，混勻，放置于-40℃冰箱中過夜。 6.從冰箱中取出樣品，用臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心，設(shè)定轉(zhuǎn)速10000rpm，離心5min。離心過程中溫度最好不要高于10℃。 |
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angelsmile335
銅蟲 (小有名氣)
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- 注冊(cè): 2007-11-24
- 專業(yè): 病原細(xì)菌、細(xì)菌感染與宿主
2樓2014-07-30 04:01:14
【答案】應(yīng)助回帖
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BIOG病毒RNA提取步驟： 1.取出析出液和洗滌液，按以下操作： a) 析出液：4.5mL加入25.5mL無(wú)水乙醇，混勻；9mL加入51mL無(wú)水乙醇，混勻。 b) 洗滌液：9mL加入21mL無(wú)水乙醇，混勻；18mL加入42mL無(wú)水乙醇，混勻。 c) 配制好的析出液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。 2.樣本處理：a) 拭子：向無(wú)RNA酶的1.5mL離心管中加入800μL生理鹽水，將拭子收集的樣本置于生理鹽水中，涮洗20秒，使細(xì)胞完全脫落，貼離心管壁擠干拭子上的液體，12,000 rpm 離心5 min，棄700μL上清，剩余100μL上清，充分振蕩混勻。 3.加入200μL 裂解液和20μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴10 分鐘。 4.加入500μL析出液，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 5.將吸附柱放入收集管內(nèi)，將上述溶液吸入吸附柱內(nèi)，靜置2 min，12,000 rpm 4℃離心1 min，棄收集管內(nèi)廢液。 6.將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液至吸附柱內(nèi)，靜置2 min，12,000 rpm 4℃離心1 min，棄收集管內(nèi)廢液。 7.將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 min，離去殘留的洗滌液。 8.取出吸附柱，放入新的1.5 mL無(wú)RNA酶離心管內(nèi)，加入30-50 μL 洗脫液，靜置3 min，12,000 rpm 4℃ 離心2 min，收集RNA溶液。 9.-70℃保存，或直接用于下一步實(shí)驗(yàn)。 |
3樓2020-06-15 09:46:40
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2020-06-20 05:23:55
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