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ice無名至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
動物組織凍存,做PCR和western,以及提取RNA和蛋白步驟 已有2人參與
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由于剛開始接觸PCR和western不是很懂,請大家?guī)兔Γ?br />
1. PCR方面,RNA防降解,以及提出的RNA量,請問,是剪成小塊放TRIZOL里剪碎即可,還是用勻漿器勻漿更好,我自己認為勻漿更好但操作麻煩,因為樣品多,還要每個都洗好勻漿器?所以,我是想100mg組織置于1.5ml EP管,加1ml TRIZOL剪碎,封存-80,不知可否? 2. 動物組織放-80凍存,做western的是剪成小塊放1.5ml EP管好,還是整塊用錫紙包好,到時提蛋白再剪? 3. 有沒詳細點的提取步驟和個人經(jīng)驗,謝謝? |

鐵蟲 (正式寫手)
| 我剛用組織提取了RNA,組織可以用液氮研磨,也可用勻漿器研磨。液氮研磨操作比較麻煩,但是研磨效果好。勻漿器我開始用的電動的,但是電動的發(fā)熱太厲害,而且電動的那個轉(zhuǎn)頭也得用DEPC水處理,還得不停地沖洗,比較麻煩,我后來改用手動勻漿器(提前泡酸處理,然后泡DEPC水處理,高壓滅菌),放置于冰上,加入裂解液進行勻漿的,提取得到的RNA含量還挺高的。 |
鐵蟲 (正式寫手)
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