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ice無名至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
動(dòng)物組織凍存，做PCR和western，以及提取RNA和蛋白步驟 已有2人參與
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由于剛開始接觸PCR和western不是很懂，請(qǐng)大家?guī)兔Γ?br />
1. PCR方面，RNA防降解，以及提出的RNA量，請(qǐng)問，是剪成小塊放TRIZOL里剪碎即可，還是用勻漿器勻漿更好，我自己認(rèn)為勻漿更好但操作麻煩，因?yàn)闃悠范啵�要每個(gè)都洗好勻漿器？所以，我是想100mg組織置于1.5ml EP管，加1ml TRIZOL剪碎，封存-80，不知可否？ 2. 動(dòng)物組織放-80凍存，做western的是剪成小塊放1.5ml EP管好，還是整塊用錫紙包好，到時(shí)提蛋白再剪？ 3. 有沒詳細(xì)點(diǎn)的提取步驟和個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，謝謝？ |
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2樓2013-12-12 12:41:48
daibingling
鐵蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ice無名: 金幣+3, ★有幫助, 其實(shí)我是想用剪碎的，這樣可以減少很多時(shí)間，雖然RNA肯定沒有勻漿的多，你覺得呢 2013-12-12 20:13:34
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ice無名: 金幣+3, ★有幫助, 其實(shí)我是想用剪碎的，這樣可以減少很多時(shí)間，雖然RNA肯定沒有勻漿的多，你覺得呢 2013-12-12 20:13:34
| 我剛用組織提取了RNA，組織可以用液氮研磨，也可用勻漿器研磨。液氮研磨操作比較麻煩，但是研磨效果好。勻漿器我開始用的電動(dòng)的，但是電動(dòng)的發(fā)熱太厲害，而且電動(dòng)的那個(gè)轉(zhuǎn)頭也得用DEPC水處理，還得不停地沖洗，比較麻煩，我后來改用手動(dòng)勻漿器（提前泡酸處理，然后泡DEPC水處理，高壓滅菌），放置于冰上，加入裂解液進(jìn)行勻漿的，提取得到的RNA含量還挺高的。 |
3樓2013-12-12 14:47:54
daibingling
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4樓2013-12-12 21:47:24
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