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隨風(fēng)追夢(mèng)

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[求助] SSR篩引物過(guò)程中PAGE檢測(cè)PCR產(chǎn)物出現(xiàn)詭異條帶求指點(diǎn)。已有2人參與

在進(jìn)行PAGE時(shí)候膠這兩天出了幾次沒(méi)法解釋的問(wèn)題，請(qǐng)賜教。
同樣的膠（8%PAGE）、同樣的電泳時(shí)間電壓（恒壓）電流、同樣的樣品，為什么會(huì)出現(xiàn)這種差異呢？
唯一存在差別的地方就是出問(wèn)題的膠都是利用剛配好的膠母液制的，然后過(guò)段時(shí)間利用同樣的膠母液再制膠電泳就沒(méi)問(wèn)題了，難道真是這個(gè)原因？

稍微好點(diǎn)

SSR篩引物過(guò)程中PAGE檢測(cè)PCR產(chǎn)物出現(xiàn)詭異條帶求指點(diǎn)。-1

壞1

SSR篩引物過(guò)程中PAGE檢測(cè)PCR產(chǎn)物出現(xiàn)詭異條帶求指點(diǎn)。-2

壞2

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1樓 2014-07-24 22:55:24

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 幺哥擼啊擼 at 2014-07-27 14:40:45
你是上午PCR下午電泳么? 這兩者之間不能像個(gè)太長(zhǎng)。然后就是膠和TBE最好一星期內(nèi)用完，常換新的跑電泳，TBE用個(gè)4次就差不多可以換了。膠版沒(méi)刷趕緊，你可以試試換新Taq酶再做一次。

問(wèn)題已解決，應(yīng)該是膠母液沒(méi)混勻，新配的膠母液放置5小時(shí)問(wèn)題就沒(méi)有了，重復(fù)驗(yàn)證了幾次，應(yīng)該是這個(gè)問(wèn)題。謝謝你之前的熱情回答。

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6樓2014-08-19 21:45:47

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幺哥擼啊擼

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-27 19:20:52

你是上午PCR下午電泳么? 這兩者之間不能像個(gè)太長(zhǎng)。然后就是膠和TBE最好一星期內(nèi)用完，常換新的跑電泳，TBE用個(gè)4次就差不多可以換了。膠版沒(méi)刷趕緊，你可以試試換新Taq酶再做一次。

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2樓2014-07-27 14:40:45

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幺哥擼啊擼

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【答案】應(yīng)助回帖

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-27 19:20:59

主要還是膠沒(méi)做好 Marker都沒(méi)跑出來(lái)

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3樓2014-07-27 14:42:02

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

3樓: Originally posted by 幺哥擼啊擼 at 2014-07-27 14:42:02
主要還是膠沒(méi)做好 Marker都沒(méi)跑出來(lái)

應(yīng)該不是膠的問(wèn)題，我也出現(xiàn)類似的情況，還應(yīng)該是體系哪有問(wèn)題，但一直沒(méi)找出來(lái)問(wèn)題所在。你的樣品、體系、程序每次都是一樣的嗎？

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4樓2014-07-28 14:25:48

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