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protein780鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
內(nèi)毒素干擾實(shí)驗(yàn)，有些不理解，求組各路朋友幫忙解惑。 已有2人參與
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1.藥典上說用未檢查出內(nèi)毒素的供試品稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，我的樣品從未做過檢測，怎么可能知道是否含有內(nèi)毒素呢？ 2.我跳過干擾實(shí)驗(yàn)直接做凝膠限量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品在最大稀釋范圍與鱟試劑反應(yīng)時(shí)仍未陽性，這個(gè)怎么排除是否是因?yàn)橛懈蓴_增強(qiáng)的因素呢？ 3.抗體類藥物在生產(chǎn)時(shí)內(nèi)毒素最大限值是多少呢？有的說10EU/劑量，是這樣的嗎？ 4.干擾實(shí)驗(yàn)的原理是什么呢？“通過比較鱟試劑與內(nèi)毒素在水溶液和供試品溶液中反應(yīng)的差異程度，來確定供試品在該濃度下是否對BET檢查有干擾”，這一說法，我不太明白，供試品里面肯定會有一部分內(nèi)毒素的呀，再加入標(biāo)準(zhǔn)品，肯定會增加呈現(xiàn)陽性的概率。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、個(gè)人認(rèn)為，這個(gè)“未檢查出內(nèi)毒素的供試品稀釋標(biāo)準(zhǔn)品”指的是：在做干擾實(shí)驗(yàn)之前，肯定會做相應(yīng)干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定供試品的合適濃度，而在此濃度下的供試品，用你確定的鱟試劑實(shí)驗(yàn)之后是不會有陽性反應(yīng)的。也就是，此濃度的供試品，內(nèi)毒素含量應(yīng)是在你定的限值以內(nèi)的； 2、你做供試品陽性反應(yīng)了嗎？如果做了，陽性反應(yīng)不是陽性的話，才能證明你的供試品對結(jié)果是有干擾的。你可以檢測一下PH值，看是否在合適的PH值范圍內(nèi)，像枸櫞酸、組氨酸等等的PH干擾都很大； 3、內(nèi)毒素限值是根據(jù)藥典上的公式算出來的，如果覺得藥典上的限值過大，可參考同類產(chǎn)品的內(nèi)毒素限值，個(gè)人認(rèn)為，嚴(yán)格一些是好事。并不是所有的抗體類藥物的內(nèi)毒素限值都是10EU/劑量； 4、這個(gè)就是一個(gè)回收實(shí)驗(yàn)。檢查一下你選擇的供試品濃度是否對鱟試劑反應(yīng)無干擾。一般 |
3樓2014-07-25 14:28:04
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樓主這帖子發(fā)出來 問題大了 內(nèi)毒素試驗(yàn)干擾試驗(yàn)是重中之重，不做干擾試驗(yàn)，內(nèi)毒素完全可以別去做了。 1.樓主你說你的最大稀釋倍數(shù)仍有干擾，首先你干擾試驗(yàn)就沒做，你選用的鱟試劑靈敏度是多少。0.015到0.25都是，你選用的鱟試劑不同。你的最大稀釋倍數(shù)和濃度也不一樣，你本身直接操作就是盲目的錯(cuò)誤。 2. 內(nèi)毒素并不是所有品種都合適，你的PH范圍在2到8么，你的樣品中是否有高價(jià)金屬離子這樣的直接會和鱟試劑螯合，你內(nèi)毒素試驗(yàn)如果要用到0.015 0.03的靈敏度鱟試劑才可以做的話，你就要去做熱原了。 3.內(nèi)毒素限度時(shí)通過你的說明書給藥途徑，給藥量來計(jì)算的，藥典上也說明了，考慮到聯(lián)合用藥。你的內(nèi)毒素限度應(yīng)該放到你計(jì)算限度的一半或者1/3. 樓主的1.4點(diǎn)是一個(gè)問題，干擾試驗(yàn)，供陽肯定要凝固，鱟試劑0.125eu相當(dāng)于溶液加入這個(gè)鱟試劑，其中內(nèi)毒素有0.125它就能凝固。 也就是說3中以下情況，對照凝固，供陽凝固，供試不凝固，水不凝固 你無干擾 對照凝固，供陽不凝固，供試不凝固，水不凝固 有干擾 對照凝固，供陽凝固，供試凝固，水不凝固 有干擾 你的第一點(diǎn)藥典的意思就是你的供試品和標(biāo)準(zhǔn)品配制時(shí)。你的供試品濃度下溶液不會干擾鱟試劑。 個(gè)人覺得樓主與其急做試驗(yàn)，不如先慢下來，看看藥典和操作規(guī)程在做，我上面寫的都是藥典里的，您現(xiàn)在的試驗(yàn)說難聽的就是瞎做，浪費(fèi)時(shí)間啊 |
6樓2014-07-26 13:59:53
protein780
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2樓2014-07-25 12:28:16
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4樓2014-07-25 17:02:30
5樓2014-07-26 09:53:56
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首先，非常非常感謝指導(dǎo)，我是有些著急的，關(guān)于我的實(shí)驗(yàn)，我想補(bǔ)充下，我做了干擾的預(yù)實(shí)驗(yàn)，做了四個(gè)梯度的濃度，想做一個(gè)干擾的預(yù)實(shí)驗(yàn)，找到一個(gè)合適濃度范圍既最小稀釋倍數(shù)，再做干擾實(shí)驗(yàn)，結(jié)果是所有濃度下鱟試劑反應(yīng)均為陽性，其他三組沒有問題，所以不是我不想做干擾實(shí)驗(yàn)，是實(shí)在是找不到合適的濃度啊，現(xiàn)在應(yīng)該是只能選擇更高靈敏度的鱟試劑，增加稀釋倍數(shù)了。您覺得呢？ |
7樓2014-07-28 09:21:59
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8樓2014-07-28 09:43:31
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9樓2014-07-28 11:05:26
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是的 藥典上有明確規(guī)定，你看下操作規(guī)程，上面有明確說明，鱟試劑靈敏度使用0.03或者更低的時(shí)候，需要做熱原。0.25的太高了 你試試0.06的看看不行再說，還有你看下你的鱟試劑廠家，你最好用湛江或者湛江安度斯的 廈門的不是很推薦，那個(gè)鱟試劑現(xiàn)在做的不好，我們江蘇這里省所基本上都不用廈門那家的了，都是推薦安度斯。你再試試，查查文獻(xiàn)再，PH是沒問題的。實(shí)在0.06的也做不了又干擾，你還只能去做熱原 這也沒辦法 |
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protein78010樓2014-07-28 18:06:56
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