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xmin828金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
關(guān)于高效液相色譜幾個(gè)問(wèn)題 已有3人參與
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1. 我們分離分析物質(zhì)時(shí)，首選柱肯定是C18柱，我在網(wǎng)上看到這么一個(gè)說(shuō)法，說(shuō)如果一個(gè)物質(zhì)在水中和正辛醇中分配系數(shù)差異較大就可以考慮使用ODS柱，那么這個(gè)差異要大到什么程度就可以認(rèn)為足夠了呢？舉個(gè)例子，如果我的這個(gè)待測(cè)物在水中的溶解度可以達(dá)到20mg/ml，在正辛醇中僅有0.1mg/ml，是否就可以考慮使用C18柱呢？ 2.流動(dòng)相中鹽的加入可以改善峰形，但是鹽的加入對(duì)柱子肯定是有損害的，那么多大濃度我們認(rèn)為就算高濃度鹽呢？20mM？25mM? 3.查閱文獻(xiàn)時(shí)，我們看到分析某些物質(zhì)時(shí)有的加有buffer的水相經(jīng)常需要調(diào)pH，這個(gè)pH的選擇有什么依據(jù)么？ 4.水相中如果含有0.1%的TFA，因?yàn)門(mén)FA也是有機(jī)物，可以直接用ACN洗脫么，還是必須要先10%有機(jī)相沖，再用純有機(jī)相保存？ 5.我看到有些人待分析物結(jié)構(gòu)含有7個(gè)羥基，個(gè)人覺(jué)得已經(jīng)算是非常高極性的物質(zhì)，可是還是用C18柱分析，我手頭有個(gè)核苷類(lèi)似物，只含有兩個(gè)羥基，老師還是建議我直接略過(guò)C18柱，換用CN柱等來(lái)分析，想問(wèn)下C18柱分析極性化合物有什么具體的經(jīng)驗(yàn)么 每個(gè)問(wèn)題5個(gè)金幣，不一定每個(gè)問(wèn)題都要能答出來(lái)，只要能幫我解決一星半點(diǎn)疑惑就會(huì)發(fā)金幣，先謝謝大家！ |
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木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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- 專(zhuān)業(yè): 藥物分析
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xmin828: 金幣+2, ★有幫助, 關(guān)于第4個(gè)問(wèn)題我的水相就是0.1%三氟乙酸水溶液，沒(méi)有鹽，有機(jī)相就是乙腈 2014-07-28 08:40:03
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xmin828: 金幣+2, ★有幫助, 關(guān)于第4個(gè)問(wèn)題我的水相就是0.1%三氟乙酸水溶液，沒(méi)有鹽，有機(jī)相就是乙腈 2014-07-28 08:40:03
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就說(shuō)說(shuō)我知道的一些問(wèn)題吧~~ 3：流動(dòng)相的pH根據(jù)兩個(gè)點(diǎn)來(lái)確定。一是待分析化合物的pKa值，可以上下2個(gè)單位浮動(dòng)；二是緩沖鹽本身的pKa值，可以上下1個(gè)單位浮動(dòng)。 4：看你水相中還有別的什么東西吧，如果還有緩沖鹽的話就必須用10%有機(jī)相先沖一下了；如果流動(dòng)相只是水和乙腈/甲醇的混合物，那么可以直接上甲醇沖洗保存。 |
2樓2014-07-27 17:38:03
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xmin828: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝！ 2014-07-28 10:06:55
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xmin828: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝！ 2014-07-28 10:06:55
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1、之所以大部分用C18，就是大部分物質(zhì)都可以有所保留，但是極性特別大的物質(zhì)出峰太靠前，如果你樣品純沒(méi)關(guān)系；但如果你樣品有雜質(zhì)，就無(wú)法達(dá)到分離的效果（很可能在死時(shí)間附近出峰）；極性特別小的物質(zhì)，出峰非�？亢螅踔量赡�1、2個(gè)小時(shí)才能洗脫下來(lái)，這個(gè)時(shí)候就選擇一些相似鍵和的柱子或者正相體系，使其出峰提前。 4、三氟乙酸也可以溶于有機(jī)相，但是都是建議要大比例的水沖洗先；或者是直接同樣有機(jī)相/水相比例，水相使用純水開(kāi)始沖洗梯度 5、我覺(jué)得你太糾結(jié)什么物質(zhì)用C18，什么時(shí)候用別的柱子，其實(shí)這是方法開(kāi)發(fā)的一部分，大致的判斷后還需要篩選柱子的分離的。關(guān)鍵是你要測(cè)的物質(zhì)是否可以和樣品中其他物質(zhì)分開(kāi)。你可以用C18柱、可以用有極性鍵和的柱子（就是固定相對(duì)于化合物的保留能力不同），或許都能出峰，就是看能不能滿(mǎn)足你的分離需要了。 |
3樓2014-07-28 09:18:35
4樓2014-08-05 15:23:44
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