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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 藥物分析 » 關于高效液相色譜幾個問題
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xmin828金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關于高效液相色譜幾個問題 已有3人參與
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1. 我們分離分析物質時，首選柱肯定是C18柱，我在網上看到這么一個說法，說如果一個物質在水中和正辛醇中分配系數差異較大就可以考慮使用ODS柱，那么這個差異要大到什么程度就可以認為足夠了呢？舉個例子，如果我的這個待測物在水中的溶解度可以達到20mg/ml，在正辛醇中僅有0.1mg/ml，是否就可以考慮使用C18柱呢？ 2.流動相中鹽的加入可以改善峰形，但是鹽的加入對柱子肯定是有損害的，那么多大濃度我們認為就算高濃度鹽呢？20mM？25mM? 3.查閱文獻時，我們看到分析某些物質時有的加有buffer的水相經常需要調pH，這個pH的選擇有什么依據么？ 4.水相中如果含有0.1%的TFA，因為TFA也是有機物，可以直接用ACN洗脫么，還是必須要先10%有機相沖，再用純有機相保存？ 5.我看到有些人待分析物結構含有7個羥基，個人覺得已經算是非常高極性的物質，可是還是用C18柱分析，我手頭有個核苷類似物，只含有兩個羥基，老師還是建議我直接略過C18柱，換用CN柱等來分析，想問下C18柱分析極性化合物有什么具體的經驗么 每個問題5個金幣，不一定每個問題都要能答出來，只要能幫我解決一星半點疑惑就會發(fā)金幣，先謝謝大家！ |
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賑早見琥珀主
木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-07-27 17:38:03
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
xmin828: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝！ 2014-07-28 10:06:55
感謝參與，應助指數 +1
xmin828: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝！ 2014-07-28 10:06:55
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1、之所以大部分用C18，就是大部分物質都可以有所保留，但是極性特別大的物質出峰太靠前，如果你樣品純沒關系；但如果你樣品有雜質，就無法達到分離的效果（很可能在死時間附近出峰）；極性特別小的物質，出峰非�？亢�，甚至可能1、2個小時才能洗脫下來，這個時候就選擇一些相似鍵和的柱子或者正相體系，使其出峰提前。 4、三氟乙酸也可以溶于有機相，但是都是建議要大比例的水沖洗先；或者是直接同樣有機相/水相比例，水相使用純水開始沖洗梯度 5、我覺得你太糾結什么物質用C18，什么時候用別的柱子，其實這是方法開發(fā)的一部分，大致的判斷后還需要篩選柱子的分離的。關鍵是你要測的物質是否可以和樣品中其他物質分開。你可以用C18柱、可以用有極性鍵和的柱子（就是固定相對于化合物的保留能力不同），或許都能出峰，就是看能不能滿足你的分離需要了。 |
3樓2014-07-28 09:18:35
4樓2014-08-05 15:23:44
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