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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 藥物分析 » 關于高效液相色譜幾個問題
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xmin828金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關于高效液相色譜幾個問題 已有3人參與
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1. 我們分離分析物質時，首選柱肯定是C18柱，我在網上看到這么一個說法，說如果一個物質在水中和正辛醇中分配系數(shù)差異較大就可以考慮使用ODS柱，那么這個差異要大到什么程度就可以認為足夠了呢？舉個例子，如果我的這個待測物在水中的溶解度可以達到20mg/ml，在正辛醇中僅有0.1mg/ml，是否就可以考慮使用C18柱呢？ 2.流動相中鹽的加入可以改善峰形，但是鹽的加入對柱子肯定是有損害的，那么多大濃度我們認為就算高濃度鹽呢？20mM？25mM? 3.查閱文獻時，我們看到分析某些物質時有的加有buffer的水相經常需要調pH，這個pH的選擇有什么依據(jù)么？ 4.水相中如果含有0.1%的TFA，因為TFA也是有機物，可以直接用ACN洗脫么，還是必須要先10%有機相沖，再用純有機相保存？ 5.我看到有些人待分析物結構含有7個羥基，個人覺得已經算是非常高極性的物質，可是還是用C18柱分析，我手頭有個核苷類似物，只含有兩個羥基，老師還是建議我直接略過C18柱，換用CN柱等來分析，想問下C18柱分析極性化合物有什么具體的經驗么 每個問題5個金幣，不一定每個問題都要能答出來，只要能幫我解決一星半點疑惑就會發(fā)金幣，先謝謝大家！ |
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賑早見琥珀主
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 藥物分析
2樓2014-07-27 17:38:03
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
xmin828: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝！ 2014-07-28 10:06:55
感謝參與，應助指數(shù) +1
xmin828: 金幣+4, ★有幫助, 謝謝！ 2014-07-28 10:06:55
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1、之所以大部分用C18，就是大部分物質都可以有所保留，但是極性特別大的物質出峰太靠前，如果你樣品純沒關系；但如果你樣品有雜質，就無法達到分離的效果（很可能在死時間附近出峰）；極性特別小的物質，出峰非常靠后，甚至可能1、2個小時才能洗脫下來，這個時候就選擇一些相似鍵和的柱子或者正相體系，使其出峰提前。 4、三氟乙酸也可以溶于有機相，但是都是建議要大比例的水沖洗先；或者是直接同樣有機相/水相比例，水相使用純水開始沖洗梯度 5、我覺得你太糾結什么物質用C18，什么時候用別的柱子，其實這是方法開發(fā)的一部分，大致的判斷后還需要篩選柱子的分離的。關鍵是你要測的物質是否可以和樣品中其他物質分開。你可以用C18柱、可以用有極性鍵和的柱子（就是固定相對于化合物的保留能力不同），或許都能出峰，就是看能不能滿足你的分離需要了。 |
3樓2014-07-28 09:18:35
4樓2014-08-05 15:23:44
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