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[求助] PCR引物二聚體的問題已有3人參與

請(qǐng)問大家，PCR產(chǎn)生引物二聚體時(shí)一般加5%的DMSO解除，但是如果加多了，會(huì)不會(huì)對(duì)PCR產(chǎn)生什么不好的影響？

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1樓 2014-07-29 10:24:20

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檸萌粉

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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:59:03

引物二聚體多的時(shí)候少加點(diǎn)引物，提高退火溫度就可以了
DMSO 5%以內(nèi)是比較安全的，可以提高特異性，超過這個(gè)數(shù)字，可能就會(huì)對(duì)聚合酶產(chǎn)生一致
推薦還是用減少引物，提高退火溫度的方法，DMSO實(shí)在要加，也別超過5%

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2樓2014-07-29 11:10:21

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luwei13566

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myprayer: 金幣+1, 鼓勵(lì)發(fā)帖積極交流。 2014-07-29 11:59:10

加DMSO的時(shí)候退火溫度也要適當(dāng)降一點(diǎn)

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大家相互幫助哈

3樓2014-07-29 11:47:10

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linzshit

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【答案】應(yīng)助回帖

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-29 18:22:37

我在clinic chemistry上看到有篇關(guān)于寫Tm計(jì)算方式的文章，它上面給出的實(shí)際數(shù)據(jù)時(shí)DMSO每上漲1%，Tm下降0.75℃，當(dāng)然了，具體可能不是這么多，當(dāng)個(gè)參考。

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4樓2014-07-29 15:57:35

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4樓: Originally posted by linzshit at 2014-07-29 15:57:35
我在clinic chemistry上看到有篇關(guān)于寫Tm計(jì)算方式的文章，它上面給出的實(shí)際數(shù)據(jù)時(shí)DMSO每上漲1%，Tm下降0.75℃，當(dāng)然了，具體可能不是這么多，當(dāng)個(gè)參考。

求該文章，謝謝！

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5樓2014-07-30 08:10:54

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linzshit

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5樓: Originally posted by 咸魚~翻身 at 2014-07-30 08:10:54
求該文章，謝謝！...

Oligonucleotide Melting Temperatures under PCR Conditions: Nearest-Neighbor Corrections for Mg2+, Deoxynucleotide Triphosphate, and
Dimethyl Sulfoxide Concentrations with Comparison to Alternative Empirical Formulas
這是標(biāo)題，應(yīng)該能下載到

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6樓2014-07-30 10:44:25

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2樓: Originally posted by 檸萌粉 at 2014-07-29 11:10:21
引物二聚體多的時(shí)候少加點(diǎn)引物，提高退火溫度就可以了
DMSO 5%以內(nèi)是比較安全的，可以提高特異性，超過這個(gè)數(shù)字，可能就會(huì)對(duì)聚合酶產(chǎn)生一致
推薦還是用減少引物，提高退火溫度的方法，DMSO實(shí)在要加，也別超過5%

這個(gè)5%是指它在pcr體系中的濃度時(shí)5%，還是未加到Pcr體系之前的濃度是5%？

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7樓2014-08-01 10:27:32

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7樓: Originally posted by 悠悠飄楊 at 2014-08-01 10:27:32
這個(gè)5%是指它在pcr體系中的濃度時(shí)5%，還是未加到Pcr體系之前的濃度是5%？...

加的應(yīng)該是純的DMSO，體系中終體積5%，比如你做25μL體系，不要加超過1.25μL

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8樓2014-08-01 10:41:24

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8樓: Originally posted by 檸萌粉 at 2014-08-01 10:41:24
加的應(yīng)該是純的DMSO，體系中終體積5%，比如你做25μL體系，不要加超過1.25μL...

好的，謝謝

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9樓2014-08-01 17:04:37

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二月smile

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引用回帖:

5％的DMSO，是在整個(gè)擴(kuò)增體系（比如25ul）中的體積比嗎？

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10樓2016-05-03 20:35:13

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