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cathy97031新蟲 (初入文壇)
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[求助]
基因組PCR用于驗證RT-PCR引物的實驗思路，請大蝦們把把關 已有7人參與
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本人要做昆蟲組織中某種基因的表達譜研究，現(xiàn)初擬實驗方案如下，因實驗第一步就出問題了，所以請各位大蝦把把關，是我的方案本身就有問題還是實驗操作的問題，也請有經(jīng)驗者給點建議： 1、網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫中查到該物種相關基因的所有序列信息，但是不確定這些基因是否都表達，所有要通過RT-PCR來驗證。 2、做RT-PCR之前為了確保引物的可用性，本人根據(jù)這些序列信息在外顯子區(qū)域選擇合適片段作為引物，而擴增出來的片段夸內(nèi)含子區(qū)域，大小在1000bp左右。 3、用天根的快速DNA提取試劑盒提取該昆蟲的基因組DNA，用設計好的引物進行PCR擴增。 4、能夠擴增出對應大小的片段即說明該對引物可用于后續(xù)的RT-PCR實驗。 5、RT-PCR  ...... 但是現(xiàn)在遇到的問題是，我提取的基因組DNA怎么都擴增不出條帶來，除了引物二聚體其他什么都沒有，引物試了好幾對都是一樣的結果；就在這時，我發(fā)現(xiàn)基因組提取試劑盒過期了至少兩個月。于是我就不知道是因為試劑盒過期導致的基因組提取失敗還是我的引物有問題，我目前沒有擴增過該昆蟲的任何基因，所以沒辦法做對照實驗，那我該怎么辦��？試劑盒的保質期就那么嚴格的嗎？還是我的實驗本身就有問題呢？請大家評評...... |
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luwei13566
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