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zb0806030銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
哪位大蝦幫忙分析一下real-time PCR的結(jié)果 已有2人參與
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附圖是我做結(jié)果，我用的Takara的Mix，每個(gè)線都是不同的引物，目的是想試一下我的引物是否好用。因?yàn)闆](méi)有什么經(jīng)驗(yàn)，不知道是引物有問(wèn)題還是模板不好導(dǎo)致的溶解曲線和擴(kuò)增曲線都不正常，哪位高手幫忙分析一下可能的原因，提點(diǎn)建議，謝謝啦！ 1.JPG 2.JPG |
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2樓2014-07-29 16:36:40
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6樓2014-07-30 10:21:34
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7樓2014-07-30 10:27:01
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【答案】應(yīng)助回帖
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zb0806030: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-07-30 13:54:49
zb0806030: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-07-30 13:54:49
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首先從你的電泳圖上來(lái)看模板和引物基本是沒(méi)問(wèn)題的，因?yàn)槟軘U(kuò)增出東西來(lái)，雜帶先不管那是你引物特異性不好，重新設(shè)計(jì)即可，但你定量熔解曲線擴(kuò)增曲線看是沒(méi)有擴(kuò)增出東西來(lái)的，建議如下：將定量后的產(chǎn)物跑電泳（2%的膠）看有無(wú)條帶；退火溫度一般都是60°；模板梯度稀釋：10倍，50倍，100倍，500倍，1000倍 |
8樓2014-07-30 13:15:15
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9樓2014-07-30 13:56:55
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10樓2014-07-30 14:00:35
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