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妙語1989金蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白印跡遇到的問題，求解答 已有1人參與
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1、3，4月份的時候電泳時間一直是1.5-2小時，且跑出來的樣品壓的比較細，呈直線。7月以后電泳時間一般有3-4小時，且跑出來的樣品比較粗，一邊快一邊慢。有時電泳液變藍。電泳完后，玻片比較熱。估計電泳液溫度在50-60度之間。我的電泳液都只使用一次，配方也未變，不知道是不是溫度影響，可不可以冰浴低溫電泳。 2、我的一抗都是用碧云天的一抗稀釋液稀釋后反復使用的，有一個蛋白，一抗特異性不強，背景較深，但奇怪的是，第一次配的一抗背景不深，往后的越來越深。這是什么原因呢。 3、熒光淬滅，蛋白表達量較低，所以會壓的比較久一點，用碧云天的ECL化學發(fā)光液發(fā)熒光時間約為1-2小時，這次換了博士德的，壓了5分鐘就看不到Actin了。熒光淬滅的情況如何解決呢？ |
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youlinglyw
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
妙語1989(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-08-01 10:23:05
妙語1989: 金幣+7, ★★★很有幫助, 謝謝，昨天冰浴跑電泳，跑出來的條帶好好看。再看今天的結(jié)果怎么樣了 2014-08-02 09:57:42
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1可以用冰浴低溫電泳，我以前跑電泳，夏天太熱，開著空調(diào)還不行，于是把電泳槽放到4度冷藏柜里去跑（電源之類的當然要放外面，不然4度冷凝進水就危險了。） 2一般情況下，一抗最好不要重復使用。個人感覺，反復使用后，里面的雜質(zhì)越來越多，會形成背景的 3熒光淬滅這個比較麻煩，有條件的話，買個看膠的軟件，可以控制曝光時間。我覺得壓膠片太考驗技術(shù)了。少加點ecl會發(fā)光長點貌似。 |
2樓2014-08-01 09:24:02
3樓2015-08-24 16:08:45
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