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ccrr110111銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助真菌細(xì)菌顯微鏡觀察常用染色劑 已有1人參與
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| 除了常用的革蘭氏染色法，還有哪些染色劑可以觀察細(xì)菌、真菌的？（尤其是真菌的染色劑） |
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ccrr110111
銅蟲 (小有名氣)
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3樓2014-08-11 20:09:39
威妞兒
銀蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 微生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ccrr110111: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-08-11 20:09:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ccrr110111: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-08-11 20:09:32
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希望對(duì)你有幫助！ （一）高碘酸-無(wú)色品紅（PAS）法 1．試劑配制 （1）0.5%高碘酸水溶液： 高碘酸0.5g 蒸餾水100ml 溶解后，用小口砂塞瓶盛裝， 置于4℃冰箱保存。使用前取出恢復(fù)至室溫。 （2）0.5%偏重亞硫酸鈉液： 偏重亞硫酸鈉0.5g 蒸餾水100ml 溶解后，用小口砂塞瓶盛裝， 置于4℃冰箱保存。使用前取出恢復(fù)至室溫。 （3）無(wú)色品紅液（Schiff試劑）： 堿性品紅1g 蒸餾水200ml 1N鹽酸20ml 偏重亞硫酸鈉1~1.5g 活性炭1~1.5g 取一只500ml的潔凈三角燒瓶盛蒸餾水200ml并煮沸，將堿性品紅加入煮沸的蒸餾水中，搖動(dòng)數(shù)分鐘使堿性品紅完全溶解（此時(shí)溶液為深紅色）；待溶液冷卻至50℃時(shí)，過(guò)濾至另一只潔凈三角燒瓶?jī)?nèi)，加入1N鹽酸20ml；待溶液冷卻至25℃左右時(shí)，再加入偏重亞硫酸鈉，隨即用膠塞塞緊瓶口，并輕輕搖動(dòng)使其溶解，此時(shí)堿性品紅液的顏色明顯變淡。將溶液置于室溫、暗處24h，此時(shí)溶液應(yīng)呈淡稻草黃色或淡紅色。加入活性炭粉，攪勻后，塞瓶口輕搖1~2min，靜置1~2h；然后，將溶液通過(guò)雙層濾紙過(guò)濾到小口砂塞瓶?jī)?nèi)，此時(shí)溶液應(yīng)完全無(wú)色，即為無(wú)色品紅，又稱Schiff液，置于4℃冰箱內(nèi)保存。 （4）亮綠水溶液： 亮綠0.2g 蒸餾水99.8ml 冰醋酸0.2ml 2．染色程序 （1）組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。 （2）切片脫蠟至水。 （3）0.5%高碘酸氧化5~8min。 （4）流水沖洗2min，再用蒸餾水洗。 （5）入無(wú)色品紅液，于暗處并加蓋作用10~20min。 （6）0.5%偏重亞硫酸鈉液滴洗2次，每次約1min。 （7）流水沖洗5min。 （8）亮綠水溶液復(fù)染數(shù)秒。 （9）稍水洗。 （10）常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。 3．染色結(jié)果 真菌呈品紅色，組織呈綠色。 （二）六胺銀法 1．試劑配制 （1）8%鉻酸水溶液： 鉻酸8g 蒸餾水100ml （2）0.5%偏重亞硫酸鈉液： 偏重亞硫酸鈉0.5g 蒸餾水100ml （3）5%硝酸銀溶液： 硝酸銀250mg 蒸餾水5ml （4）3%六次甲基四胺水溶液： 六次甲基四胺3g 蒸餾水100ml （5）5%四硼酸鈉液： 四硼酸鈉5g 蒸餾水100ml （6）六胺銀貯備液： 5%硝酸銀水溶液5ml 3%六次甲基四胺水溶液100ml 將3%六次甲基四胺水溶液加入5%硝酸銀溶液中，隨即形成白色沉淀；此沉淀在搖動(dòng)中立即溶解。取澄清液置于4℃冰箱內(nèi)保存，可在數(shù)月內(nèi)使用。 （7）六胺銀工作液： 六胺銀貯備液10ml 蒸餾水25ml 5%四硼酸鈉液2ml 將5%四硼酸鈉液加入蒸餾水中，然后加入六胺銀貯備液，攪拌混合后即可使用。 （8）1%氯化金水溶液： 氯化金1g 蒸餾水100ml 先配制上述1%氯化金液貯存，另用蒸餾水與原液按9∶1稀釋成0.1%氯化金液。 （9）2%硫代硫酸鈉液： 硫代硫酸鈉2g 蒸餾水100ml （10）亮綠水溶液： 亮綠0.2g 蒸餾水100ml 冰醋酸0.2ml （11）橙黃G染液： 橙黃G2g 蒸餾水100ml 磷鎢酸5g 2．染色程序 （1）組織塊固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。 （2）切片脫蠟至水。 （3）8%鉻酸水溶液氧化20min。 （4）自來(lái)水稍洗。 （5）5%偏重亞硫酸鈉液處理1min。 （6）流水沖洗5min，再用蒸餾水洗2次。 （7）置入六胺銀工作液于溫箱內(nèi)（58~60℃）60~90min，至切片呈黃褐色，即在顯微鏡下觀察，見真菌呈黑褐色為止。 （8）蒸餾水洗。 （9）滴入0.1%氯化金溶液調(diào)色2~3min。 （10）流水稍洗。 （11）2%硫代硫酸鈉液處理2~5min。 （12）流水沖洗5min。 （13）用亮綠液復(fù)染20~40s，或用橙黃G復(fù)染1~2s。 （14）快速水洗。 （15）95%乙醇和無(wú)水乙醇脫水。 （16）二甲苯透明，中性樹膠封固。 3．染色結(jié)果 各種真菌均被著色。菌絲和孢子呈明顯的黑褐色，抗酸桿菌也呈黑褐色。背景為淡綠色（用亮綠復(fù)染時(shí)）或橙黃色（用橙黃G復(fù)染時(shí)）或紅色（用伊紅復(fù)染時(shí)）。 （三）愛先藍(lán)（alcian blue）法 1．試劑配制 （1）愛先藍(lán)水溶液（pH2.5）： 愛先藍(lán)1g 蒸餾水97ml 冰醋酸3ml 麝香草酚50mg （2）核固紅液：參見網(wǎng)狀纖維染色“（一）氫氧化銀氨液浸染法（Ⅰ）”。 2．染色程序 （1）組織固定于4%中性甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片。 （2）切片脫蠟至水。 （3）愛先藍(lán)染液染10~20min。 （4）稍水洗。 （5）核固紅液復(fù)染5~10min。 （6）稍水洗。 （7）常規(guī)脫水、透明，中性樹膠封固。 3．染色結(jié)果 新型隱球菌的莢膜呈藍(lán)色，胞核呈紅色。 |
2樓2014-08-04 22:32:02
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