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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 細胞培養(yǎng)問題
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hakkie新蟲 (初入文壇)
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細胞培養(yǎng)問題 已有5人參與
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最近在養(yǎng)大腸癌細胞Lovo。出現(xiàn)個問題很是困擾我——細胞總是抱團粘連（一般5-15個一團）。 剛傳代接種時就這樣，抱團細胞在2/3以上。以后隨著培養(yǎng)時間的進展，抱團細胞會長成稠密的一片，看不到細胞輪廓，模糊的一片，上面還有分散的單個圓的細胞，就像一個大燒餅上撒著一些芝麻。。。細胞有層疊，這樣勢必會使很多底層的細胞攝取營養(yǎng)不良，所以培養(yǎng)基雖然消耗的很快，細胞長的也快（因為太稠密不只一層），但總是有不少的漂浮細胞。最主要的是我下一步要做轉染，這樣的生長狀態(tài)我是沒法看轉染效率的，連細胞輪廓都沒有，最后都是一坨一坨的，郁悶！ 培養(yǎng)情況：10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，25cm^2培養(yǎng)瓶。消化時間2分鐘，終止消化后離心600rpm 5min。 分析可能的原因：1、消化時間短；2、一開始接種密度就偏大，細胞過密，加上傳代晚，細胞生長過度；3、血清比例高；4、消化后吹打不均勻 以上原因，1和4都針對地試過相應的操作，沒什么效果，可排除。3還未試。自己感覺像第二個，但一次生長過度怎么會使細胞以后一直互相粘連？？ 本人能想到的就這些了，問題尚未解決，還望高人指點啊~ IMG_20140810_122052.jpg IMG_20140810_122115.jpg |
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siyecao1121
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正如樓上所言，有的細胞就是這樣喜歡扎堆，可以請教實驗室養(yǎng)過這種細胞的師姐師兄~ 我沒養(yǎng)過這種細胞，單就我之前養(yǎng)細胞的經(jīng)驗看，我感覺是消化時間可能長了，消化的可能有點過呢，細胞消化不充分的話，不容易吹起來，你在傳代的時候是否發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象？細胞消化過了的話，首先細胞特別容易吹起來，而且會出現(xiàn)成團現(xiàn)象（你可以在終止消化的時候鏡檢觀察是否有大量成團細胞），其次，消化過了的話有些細胞膜被損壞了，細胞慢慢就死亡了，所以在后續(xù)的培養(yǎng)的時候培養(yǎng)基中漂浮的細胞相對多些~另外，細胞成團也有可能是你傳代的時候沒有將細胞吹勻的原因~ 樓主說的單個圓的細胞，可能是消化后狀態(tài)不好不能正常貼壁的細胞，也有可能是成堆的細胞剛剛分裂但是還沒來得及貼壁的細胞~ |
4樓2014-08-12 16:09:32
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