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hakkie新蟲(chóng) (初入文壇)
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細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題 已有5人參與
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最近在養(yǎng)大腸癌細(xì)胞Lovo。出現(xiàn)個(gè)問(wèn)題很是困擾我——細(xì)胞總是抱團(tuán)粘連（一般5-15個(gè)一團(tuán)）。 剛傳代接種時(shí)就這樣，抱團(tuán)細(xì)胞在2/3以上。以后隨著培養(yǎng)時(shí)間的進(jìn)展，抱團(tuán)細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)成稠密的一片，看不到細(xì)胞輪廓，模糊的一片，上面還有分散的單個(gè)圓的細(xì)胞，就像一個(gè)大燒餅上撒著一些芝麻。。。細(xì)胞有層疊，這樣勢(shì)必會(huì)使很多底層的細(xì)胞攝取營(yíng)養(yǎng)不良，所以培養(yǎng)基雖然消耗的很快，細(xì)胞長(zhǎng)的也快（因?yàn)樘砻懿恢灰粚樱�，但總是有不少的漂浮�?xì)胞。最主要的是我下一步要做轉(zhuǎn)染，這樣的生長(zhǎng)狀態(tài)我是沒(méi)法看轉(zhuǎn)染效率的，連細(xì)胞輪廓都沒(méi)有，最后都是一坨一坨的，郁悶！ 培養(yǎng)情況：10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，25cm^2培養(yǎng)瓶。消化時(shí)間2分鐘，終止消化后離心600rpm 5min。 分析可能的原因：1、消化時(shí)間短；2、一開(kāi)始接種密度就偏大，細(xì)胞過(guò)密，加上傳代晚，細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)度；3、血清比例高；4、消化后吹打不均勻 以上原因，1和4都針對(duì)地試過(guò)相應(yīng)的操作，沒(méi)什么效果，可排除。3還未試。自己感覺(jué)像第二個(gè)，但一次生長(zhǎng)過(guò)度怎么會(huì)使細(xì)胞以后一直互相粘連？？ 本人能想到的就這些了，問(wèn)題尚未解決，還望高人指點(diǎn)啊~ IMG_20140810_122052.jpg IMG_20140810_122115.jpg |
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3樓2014-08-12 14:36:59
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正如樓上所言，有的細(xì)胞就是這樣喜歡扎堆，可以請(qǐng)教實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)過(guò)這種細(xì)胞的師姐師兄~ 我沒(méi)養(yǎng)過(guò)這種細(xì)胞，單就我之前養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)看，我感覺(jué)是消化時(shí)間可能長(zhǎng)了，消化的可能有點(diǎn)過(guò)呢，細(xì)胞消化不充分的話，不容易吹起來(lái)，你在傳代的時(shí)候是否發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象？細(xì)胞消化過(guò)了的話，首先細(xì)胞特別容易吹起來(lái)，而且會(huì)出現(xiàn)成團(tuán)現(xiàn)象（你可以在終止消化的時(shí)候鏡檢觀察是否有大量成團(tuán)細(xì)胞），其次，消化過(guò)了的話有些細(xì)胞膜被損壞了，細(xì)胞慢慢就死亡了，所以在后續(xù)的培養(yǎng)的時(shí)候培養(yǎng)基中漂浮的細(xì)胞相對(duì)多些~另外，細(xì)胞成團(tuán)也有可能是你傳代的時(shí)候沒(méi)有將細(xì)胞吹勻的原因~ 樓主說(shuō)的單個(gè)圓的細(xì)胞，可能是消化后狀態(tài)不好不能正常貼壁的細(xì)胞，也有可能是成堆的細(xì)胞剛剛分裂但是還沒(méi)來(lái)得及貼壁的細(xì)胞~ |
4樓2014-08-12 16:09:32
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首先謝謝回復(fù)！ 1、問(wèn)過(guò)養(yǎng)過(guò)這個(gè)細(xì)胞的老師，說(shuō)這樣粘連是不正常的。 2、我的消化時(shí)間不算長(zhǎng)，養(yǎng)過(guò)這個(gè)細(xì)胞的老師說(shuō)他都是消化四五分鐘。我消化時(shí)也注意到消化時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞明顯粘連，所以在兩三分鐘的時(shí)候看細(xì)胞都有脫落的趨勢(shì)了就及時(shí)終止消化了。之前也考慮過(guò)消化后細(xì)胞沒(méi)有吹打混勻，試過(guò)吹打上百下，還是成團(tuán)打不散！ 3、所用培養(yǎng)基中的胎牛血清，剛到時(shí)我直接在37℃解凍的，不知道這會(huì)不會(huì)導(dǎo)致現(xiàn)在的情況。 |
5樓2014-08-18 16:22:22
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7樓2014-08-21 13:24:58
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8樓2014-08-21 17:48:24
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9樓2014-08-22 13:56:08
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