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lilyhht

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[求助] 擬南芥RNA的提取已有1人參與

各位前輩，我在提取RNA的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在用異丙醇沉淀RNA時(shí)會(huì)出現(xiàn)大量的白色沉淀，RNA不易溶解，260/280=1.8左右，260/230=0.6。我給測(cè)序公司打電話咨詢說(shuō)260/230=0.6不符合高通量測(cè)序要求，要大于1.5。
不知怎樣減少這些白色鈣化物質(zhì)的污染？

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1樓 2014-08-12 23:26:38

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lilyhht

銅蟲(chóng) (正式寫手)

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2樓: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-13 18:06:41
應(yīng)該是之前的幾部沒(méi)有做好，用的是trizon提取的嗎

是用RNAiso Plus 提取的，類似trizonl，第一步加的是RNAiso Plus，后面的步驟一樣，異丙醇沉淀后，有白色沉淀，用75%酒精洗，最后加水有溶的，但是不完全融掉，好像是雜質(zhì)，白色的，說(shuō)不清是什么，我就離心，取上清，白色的不要了，結(jié)果260/230>1.0了。不知道大家提取的時(shí)候有沒(méi)有類似情況，總不能每次都是最后一步加水再離心吧，好像浪費(fèi)很多RNA。求解答，謝謝。

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我想有所作為，但找不到方向，我該干什么，從哪里開(kāi)始。

3樓2014-08-14 08:59:19

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zero19871029

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lilyhht: 金幣+5 2014-08-14 08:51:32

應(yīng)該是之前的幾部沒(méi)有做好，用的是trizon提取的嗎

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2樓2014-08-13 18:06:41

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ahhngwj

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額。。。如果沒(méi)記錯(cuò)，這個(gè)白色的應(yīng)該就是RNA啊。。�？梢约覦EPC水溶解，還是不溶解的話，55度助融。

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4樓2014-08-16 09:02:59

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引用回帖:

3樓: Originally posted by lilyhht at 2014-08-14 08:59:19
是用RNAiso Plus 提取的，類似trizonl，第一步加的是RNAiso Plus，后面的步驟一樣，異丙醇沉淀后，有白色沉淀，用75%酒精洗，最后加水有溶的，但是不完全融掉，好像是雜質(zhì)，白色的，說(shuō)不清是什么，我就離心，取上清 ...

我也遇到過(guò)這種情況，當(dāng)時(shí)我是因?yàn)槟サ娜~片太多了，估計(jì)是超出了trizol的提取能力~

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5樓2014-08-18 11:44:47

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