 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1275 | 回復(fù): 5 | ||
dongjiqiao鐵桿木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
DEAE FF 純化商品酶，只有一個(gè)峰 已有2人參與
|
|
實(shí)驗(yàn)（1）上樣緩沖液：Tris-Hcl +0.01M Nacl，pH 7.0 ，洗脫緩沖液：Tris-Hcl +1.0 M Nacl，pH 7.0 ，進(jìn)樣2ml/次，共兩次，洗脫時(shí)，0-100%，這時(shí)峰就一起出來了。（第一次做實(shí)驗(yàn)，緩沖液也沒有抽濾，出現(xiàn)了毛刺峰，這個(gè)問題之前請(qǐng)教過大家了） 實(shí)驗(yàn)（2）上樣緩沖液：Tris-Hcl +0.01M Nacl，pH 7.0 ，洗脫緩沖液：Tris-Hcl +0.5M Nacl，pH 7.0 ，進(jìn)樣2ml/次，共兩次，洗脫時(shí)，0-30%，30%-70%,705-100%，但是只在低鹽濃度時(shí)有一個(gè)峰出現(xiàn)，后面的就沒有峰了，柱子上有很重的顏色沒有洗下來。 關(guān)于這個(gè)實(shí)驗(yàn)，有幾點(diǎn)不明白的地方：1、實(shí)驗(yàn)（1）中的峰在50%洗脫時(shí)差不多都洗脫下來了，為什么實(shí)驗(yàn)（2）中在相當(dāng)濃度（70%-100%）時(shí)反而沒有樣品洗下來呢？是不是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)（1）梯度射的陡了？ 2、吸附在柱子上的顏色較重的樣品，后面用水沖洗，能下下來一部分，再用20%乙醇沖洗，大部分洗下來了，但是還有一些洗不掉了。問過一個(gè)老師，他說可能是我的緩沖液不合適，但是我查了下，pH7.0 的緩沖液，GE 柱子說明書上推薦的，pH6.0-7.0 的是 bis-tris,pH 6.2-7.2 的是 bis-tris propane ,我查了下， bis-tris是1,3-二[三(羥甲基)甲氨基]甲烷， bis-tris propane是1,3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷。這些緩沖液差別應(yīng)該和tris差不多吧？ 3、上樣緩沖液是不是該添加Nacl呢？不加的話是不是有疏水作用，影響吸附？ 0.5M 洗脫緩沖液.JPG 1M 洗脫緩沖液.JPG |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求調(diào)劑院校信息
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085600材料與化工306
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
328求調(diào)劑，英語六級(jí)551，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué)070300 學(xué)碩336求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286分人工智能專業(yè)請(qǐng)求調(diào)劑愿意跨考！
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(qǐng)(333分)
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
280求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
269專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料學(xué)碩301分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 陰離子DEAE純化酶，洗脫峰毛刺兒，洗脫后還有毛刺兒，希望得到中間條帶的樣品
已經(jīng)有9人回復(fù)
- DEAE-Sepharose Fast Flow column純化問題，求高手指教
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 多糖純化關(guān)于DEAE
已經(jīng)有9人回復(fù)
- DEAE——Sepharose離子交換純化 流速變慢
已經(jīng)有7人回復(fù)
- DEAE Sepharose-CL6B凝膠柱層析純化阿拉伯木聚糖
已經(jīng)有6人回復(fù)
- DEAE-Sepharose FF層析柱規(guī)格 及填料的預(yù)處理
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于 DEAE Sepharose FF 使用方法
已經(jīng)有3人回復(fù)
- DEAE-纖維素陰離子交換樹脂純化多糖，柱子重生
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 蛋白純化-過DEAE陰離子交換柱
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 使用DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析純化蛋白后雜蛋白的洗脫
已經(jīng)有7人回復(fù)
- DEAE-cellulose 52 純化多糖
已經(jīng)有15人回復(fù)
dongjiqiao
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6702.7
- 散金: 242
- 紅花: 5
- 帖子: 1130
- 在線: 84.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 680234
- 注冊(cè): 2008-12-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
2樓2014-08-14 09:34:15
yuanbo934
至尊木蟲 (著名寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 29 (小學(xué)生)
- 金幣: 25004.5
- 紅花: 4
- 帖子: 2922
- 在線: 230.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 462771
- 注冊(cè): 2007-11-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dongjiqiao: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝指導(dǎo)！ 2014-08-19 14:04:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dongjiqiao: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝指導(dǎo)！ 2014-08-19 14:04:47
| 從電導(dǎo)的變化上看，柱子里有氣泡了，為什么不手動(dòng)梯度洗脫，而用線性洗脫？線性洗脫分離不好，就是方便。梯度洗脫可以自己控制鹽的濃度，分離的別較好。（1）蛋白的洗脫，這和離子濃度與流速有關(guān)（2）洗脫不下來的可能也有色素存在，可考慮用0.5的氫氧化鈉清洗，具體方法可以見柱子的再生。（3）添加Nacl影響并不大。我們一般用泵進(jìn)樣，這樣可以進(jìn)入大量發(fā)酵液，我曾經(jīng)直接進(jìn)入過兩升發(fā)酵液，這樣目的蛋白會(huì)很多，然后用手動(dòng)洗脫每次增加5%的鹽濃度，洗到50%后改用線性洗脫，一般50%后我的目的蛋白幾乎沒有了。 |
3樓2014-08-14 19:07:34
wolfman840
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 225 (大學(xué)生)
- 金幣: 3524.8
- 散金: 20
- 紅花: 12
- 帖子: 702
- 在線: 63.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 902627
- 注冊(cè): 2009-11-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dongjiqiao: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝回復(fù)！受教了！ 2014-08-19 14:12:00
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dongjiqiao: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝回復(fù)！受教了！ 2014-08-19 14:12:00
|
給你幾個(gè)建議： 1，實(shí)驗(yàn)（1）的線性洗脫體積不夠，從圖譜上看，沒分開，峰有平臺(tái)期。建議你用30CV進(jìn)行線性梯度洗脫后，做peak cutting。 2.上樣別加NaCl，Cl離子是DEAE的標(biāo)準(zhǔn)反離子，影響吸附。 3. 調(diào)節(jié)pH，上樣pH在等電點(diǎn)以上，洗脫pH在等電點(diǎn)以下。這個(gè)你看一下GE的陰離子交換層析手冊(cè)。 4. 0.5M的線性梯度還可以優(yōu)化一下，如果只有一個(gè)峰的話，證明離子強(qiáng)度太低，還有東西在柱子上沒洗下來。 |
4樓2014-08-15 17:33:24
dongjiqiao
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6702.7
- 散金: 242
- 紅花: 5
- 帖子: 1130
- 在線: 84.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 680234
- 注冊(cè): 2008-12-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
5樓2014-08-19 14:11:00
dongjiqiao
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6702.7
- 散金: 242
- 紅花: 5
- 帖子: 1130
- 在線: 84.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 680234
- 注冊(cè): 2008-12-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
6樓2014-08-19 14:40:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 dongjiqiao 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 十三加油 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩 348分求調(diào)劑 +3 | 冬辭. 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +3 | 鳳凰院丁真 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學(xué)-071000生物學(xué)-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專業(yè)求調(diào)劑 +6 | hanamiko 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +3 | ￣^￣゜汗 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 320求調(diào)劑0856
+3
|
不想起名字112 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|