 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1496 | 回復(fù): 5 | ||
賦文小子新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
求助：一般抗原處理的辦法由那些？ 已有2人參與
|
|
現(xiàn)在遇到一個(gè)問(wèn)題：抗原的特異性不高，和陽(yáng)性的樣品約有三分之一呈非反應(yīng)性。嘗試過(guò)多種抗原，抗原之間沒(méi)有太大的差異。懷疑可能是抗原的空間結(jié)構(gòu)，或者是抗原的決定簇沒(méi)有暴露出來(lái)。各位蟲友有沒(méi)有一些處理抗原或者蛋白的方法可以借鑒一下。還有一個(gè)就是后期抗原需要交聯(lián)堿性磷酸酶，目前還不知道是否對(duì)決定簇會(huì)有覆蓋，歡迎做過(guò)的蟲友指導(dǎo)。 PS：金幣不多，暫且放上50個(gè)bb吧。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料專碩英一數(shù)二306
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過(guò)A區(qū)線
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有21人回復(fù)
-
0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章
已經(jīng)有20人回復(fù)
-
279分求調(diào)劑 一志愿211
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085600材料與化工 求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
317求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 抗原固定在NC膜上
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求教怎么樣才能找到一個(gè)蛋白抗原性較強(qiáng)的區(qū)域
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求CA125抗原單位U/mL與ng/mL換算系數(shù)是多少？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)小肽類抗原問(wèn)題求助
已經(jīng)有3人回復(fù)
- CLIEA 間接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)小分子抗原求助
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】請(qǐng)問(wèn)哪有賣弓形蟲循環(huán)抗原及其多克隆抗體的
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 【求助/交流】半抗原與蛋白偶聯(lián)問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】做ELISA測(cè)效價(jià)的時(shí)候包被抗原濃度問(wèn)題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助】乙肝表面抗原定量檢測(cè)試劑盒的溯源性
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】間接Elisa中，抗原濃度越高，陽(yáng)性值反而越低？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助】氫氟酸和硝酸混合廢水的處理辦法
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】IDEXX的豬瘟抗體抗原檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】求一些常用的配對(duì)的抗原抗體
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】抗體能否轉(zhuǎn)化為抗原
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】抗原商家推薦。。
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】抗原抗體的解離
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】關(guān)于小分子抗原
已經(jīng)有5人回復(fù)
zhenwuhuang
至尊木蟲 (文學(xué)泰斗)
- 應(yīng)助: 4351 (副教授)
- 金幣: 10192.3
- 散金: 1
- 紅花: 137
- 帖子: 65925
- 在線: 2433.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 2227382
- 注冊(cè): 2013-01-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 人類營(yíng)養(yǎng)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
賦文小子: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝，在問(wèn)下有沒(méi)有單獨(dú)處理抗原的辦法，既能保持其活性，又能夠改變一下其結(jié)構(gòu) 2014-08-22 13:10:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
賦文小子: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝，在問(wèn)下有沒(méi)有單獨(dú)處理抗原的辦法，既能保持其活性，又能夠改變一下其結(jié)構(gòu) 2014-08-22 13:10:11
|
常用的半抗原與蛋白偶聯(lián)方法簡(jiǎn)介 來(lái)源： 龔紅娟的日志 常用的半抗原與蛋白偶聯(lián)方法簡(jiǎn)介 （一）分子中含有羧基或可羧化的半抗原的偶聯(lián)） 1、混合酸酐法，也稱氯甲酸異丁酯法（isobutyl chloroformate method） 偶聯(lián)時(shí)，半抗原分子中的羧基可與氯甲酸異丁酯在有機(jī)溶劑中形成混合酸酐(mixed acid anhydride),然后與蛋白分子中的氨基形成肽鍵。 氨甲喋呤（MIT）與β-半乳糖苷酶偶聯(lián)的混合酐法 1、5．8mg MIT用0.1ml二甲基甲酰胺溶解，冷卻至10度，加2ul氯甲酸異丁酯，10度攪拌反應(yīng)30分鐘。 2、1.5mg酶用2ml 50 m mol/L Na2CO3溶解。 3、10度反應(yīng)4小時(shí)（必要時(shí)加NaOH,以維持溶液的pH為9.0，q然后4度過(guò)夜。 4、過(guò)sephadex G-25層析柱，柱用含NaCl 100m mol/L、MgCl2 10 m mol/L、2-巰基乙醇10 m mol/L的50m mol/L Tris-醋酸緩沖液(pH7.5)平衡和洗脫，合并含酶的洗脫管內(nèi)液體，進(jìn)一步純化后，保存于含BSA 0.1％（w/v）、NaN3 0.02%(w/v)的緩沖液中。 2、碳化二亞胺法制備3,3`,5-三碘甲腺氨酸-血藍(lán)蛋白免疫原的操作步驟 1、 取EDC 100mg , 用pH8.0的10 m mol/L PBS液2.5ml使之充分溶解（I液） 2、 取3，3`,5-三碘甲腺原氨酸 25mg , 用0.2mol/L NaOH 溶液2ml 溶解(II液) 3、 取血藍(lán)蛋白(lemocyanin) 25mg, 溶于10mmol/L PBS （pH8.0）液中（III液） 4、 將II液與III液混合，在磁力攪拌下逐滴加入I液（余下0.5ml） 5、 室溫下避光攪拌1小時(shí)，逐滴加入余下的I液 6、 4度攪拌12小時(shí) 7、 靜置10小時(shí)（4度） 8、 有蒸餾水使之充分透析（約48小時(shí)），得免疫原。 3、孕酮與與β-半乳糖苷酶偶聯(lián)的N-羥琥珀酰亞胺酯法 1、 用二堊烷(dioxane)溶解孕酮-11-半琥珀酸酯，配成濃度為100m mol/L的溶液。 2、 加羥琥珀酰亞胺(N-hydroxysuccinimide) 100 m mol/L 和 DCC（二環(huán)已基碳化二亞胺），200 m mol/L, 4度反應(yīng)16小時(shí)。 3、 用簿層掃描方法純化(氯仿：水=9：1) 4、 按孕酮/酶摩爾濃度比約為10的比例，將上述溶液加入到酶液（用pH7.4，濃度50 m mol/L的磷酸緩沖液溶解）中。 5、 （二）含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯(lián) 1、芳香胺類半抗原與蛋白質(zhì)重氮化偶聯(lián)的操作步驟 1、 用0.1 mol/L HCl溶液配制 4 m mol/L濃度的半抗原。 2、 滴加1％NaNO2(過(guò)量)，4度持續(xù)攪拌。NaNO2的加入量可用淀粉-碘化物試紙或在白色磁磚上加1％淀粉和50m mol/L KI進(jìn)行監(jiān)控。游離亞硝酸可將氧化物氧化成碘，碘再與淀粉反應(yīng)變成藍(lán)黑色。 3、 溶液變成藍(lán)黑色后，繼續(xù)反應(yīng)15分鐘。 4、 用pH9.0、濃度為200m mol/L的硼酸或碳酸緩沖液溶解蛋白。 5、 邊攪拌，邊加入重氮化的半抗原（防止局部發(fā)生酸過(guò)量現(xiàn)象），調(diào)節(jié)pH到9.5。 6、 冰箱中攪拌反應(yīng)2小時(shí)，不斷調(diào)節(jié)pH到9.0。 7、 用PBS透析2天 8、 -20度保存（濃度為20mg/mL） 雙功能的酰亞胺酯(imidate esters)可以氨基反應(yīng)，形成脒。例如：用二甲基已二酰亞胺酯(dimethyladipimide)將去甲基三正喋呤(desmethylmortriptyline)與β-半乳糖苷酶偶聯(lián)。 2、、應(yīng)用雙功能酰亞胺酯（imidate esters）制備去甲基三正喋呤-與β-半乳糖苷酶標(biāo)記特的操作步驟 1、 用含5％（W/V）N-乙基嗎啉的無(wú)水甲醇0.4ml,在室溫下溶解570ug去甲基三正喋呤和488ug 二甲基已二酰亞胺酯(dimethyladipimide)(A液) 2、 取與β-半乳糖苷酶 100 ug, 溶于pH9.9的100 m mol/L碳酸緩沖液（含MgCl2 10m mol/L,2-巰基乙醇 10 m mol/L 0.1ml(B液) 3、 將A液倒入B液。 4、 20度反應(yīng)90分鐘后，加含NaCl 100 m mol/L, MgCl2 10 m mol/L和2-巰基乙醇 10 m mol/L、pH7.5的Tris-醋酸緩沖液(50m mol/L) 1ml, 終止反應(yīng)。 5、 過(guò)sephadex G-25, 去除小分子物質(zhì)，得酶標(biāo)記物（約75％的酶與半抗原結(jié)合，但用三正喋呤代替去甲三正喋呤(demethylmortriptyline )進(jìn)行偶聯(lián)，則只有15％的酶與之結(jié)合。 （三）含巰基半抗原的偶聯(lián) 可用馬來(lái)酰亞胺方法與蛋白偶聯(lián)。此外，將載體蛋白用溴乙酰胺(bromoacetamide)激活�；�?qū)⑤d體蛋白與半抗原在pH4.0的醋酸緩沖液中，通過(guò)過(guò)氧化氫的作用形成二硫鍵，也可以將半抗原連接到蛋白質(zhì)分子上。 （四）含羥基的半抗原偶聯(lián) 醇類羥基通過(guò)形成半琥珀酸酯轉(zhuǎn)化為羧基的操作步驟 1、 15g 2,2,2-三氯乙醇（2,2,2-trichloroethanol）,12g 琥珀酸酐(succinic anhydride)和8.7ml 三乙基胺(triethylamime)用100 ml乙酰乙酯溶解。 2、 加熱回流1小時(shí)。 3、 減壓蒸餾去溶劑，,殘余物用5% NaHCO3水溶液溶解。 4、 用乙醚洗滌兩次，然后用H2SO4進(jìn)行s酸化（pH到2.0）. 5、 用水洗滌固形物（為三氯乙基半琥珀酸酯）兩次，用氯仿-已烷使其結(jié)晶（產(chǎn)量約75％，熔點(diǎn)88-89度） 6、 取2.5g 半琥珀酸酯溶于6.5ml 亞硫酰氯(thionyl chloride)中，65度加熱30分鐘。 7、 減壓蒸發(fā)，干燥1小時(shí)（高度真空條件下）。 8、 將上述產(chǎn)生（2，2，2-三氯憶基琥珀酰氯）溶于15ml N,N-二甲基-乙酸乙酰胺(N,N-dimethylethylacetamide)中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。 9、 65度真空蒸發(fā)后，用異丙醇使結(jié)晶析出來(lái)（得鹽酸化的結(jié)晶---5`-酯約84％，熔點(diǎn)160度）。 10、用溶于二甲基甲酰胺中的鋅和醋酸解離三氯乙酯，得f半抗原-半琥珀酸酯，這樣引和的羧基可與蛋白質(zhì)偶聯(lián)（如用碳化二亞胺化）。 半抗原用NaIO4氧化其中的糖苷醇后再與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的操作步驟 1、 20mg 腺苷溶于1ml 100m mol/L NaIO4溶液中，4度避光反應(yīng)30分鐘。 2、 加1滴乙二醇(得A液) 3、 將A液加入到β-半乳糖苷酶液（20mg/ml,用150m mol/L N |
2樓2014-08-21 13:09:32
賦文小子
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 299.5
- 帖子: 112
- 在線: 24.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 2624346
- 注冊(cè): 2013-08-30
3樓2014-08-22 13:05:54
賦文小子
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 299.5
- 帖子: 112
- 在線: 24.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 2624346
- 注冊(cè): 2013-08-30
|
不是免疫佐劑 我現(xiàn)在做的事診斷試劑，就是要在抗原上面交聯(lián)堿性磷酸酶，但是效果不好（有反應(yīng)，但是也有部分不會(huì)反應(yīng)）。試過(guò)多種的抗原，都差不多，所以認(rèn)為可能是抗原的表位問(wèn)題，會(huì)不會(huì)是可能由于抗原的空間結(jié)構(gòu)使抗原表位沒(méi)有暴露出來(lái)，所以現(xiàn)在目前想做的是先對(duì)抗原進(jìn)行處理一下，看是否會(huì)有效果。 以前沒(méi)有做過(guò)抗原（蛋白）處理這一塊，所以想問(wèn)下抗原的處理辦法一般是有哪些，謝謝。 |
4樓2014-08-22 16:30:53
蔡小蕾99
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 156.7
- 帖子: 132
- 在線: 24.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3569153
- 注冊(cè): 2014-12-01
- 性別: MM
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
5樓2017-07-20 17:27:18
yyy0305
至尊木蟲 (著名寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 114 (高中生)
- 金幣: 9560.5
- 散金: 50
- 紅花: 30
- 帖子: 1481
- 在線: 383小時(shí)
- 蟲號(hào): 1571969
- 注冊(cè): 2012-01-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
6樓2017-07-20 17:46:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 賦文小子 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過(guò)A區(qū)線 +8 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +3 | www_q 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 本人考085602 化學(xué)工程 專碩 +17 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +7 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +5 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | △小透明* 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 有沒(méi)有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭(zhēng) 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|