dai1103

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[求助] 反轉(zhuǎn)錄試劑盒選擇已有4人參與

親們：我的實(shí)驗(yàn)是提取病毒RNA（提取的病毒濃度不高），然后反轉(zhuǎn)錄做普通PCR，目的條帶250bp-900bp，請(qǐng)問(wèn)，選擇哪個(gè)反轉(zhuǎn)錄試劑盒好點(diǎn)？

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1樓 2014-08-21 21:34:43

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johnkm66

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dai1103(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-27 19:22:18

反轉(zhuǎn)錄時(shí)，常常由于RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的存在，導(dǎo)致結(jié)果不理想。可以考慮選擇退火溫度可至55度甚至65度的試劑盒（酶）。65度退火，正好可以讓二級(jí)結(jié)構(gòu)完全打開(kāi)。

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6樓2014-08-26 16:08:17

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和一

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dai1103: 金幣+1, ★★★★★最佳答案 2014-09-04 15:34:37

反轉(zhuǎn)錄試劑盒其實(shí)都差不多，我們都是用的國(guó)產(chǎn)的，效果也很好，國(guó)外公司的可以選 Invitrogen或者TAKARA 的。

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2樓2014-08-21 21:37:46

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2樓: Originally posted by 和一 at 2014-08-21 21:37:46
反轉(zhuǎn)錄試劑盒其實(shí)都差不多，我們都是用的國(guó)產(chǎn)的，效果也很好，國(guó)外公司的可以選 Invitrogen或者TAKARA 的。

做普通PCR 選擇Takala的可以嗎？我的病毒濃度不高。有用過(guò)Takala的RR037A，剛開(kāi)始做出來(lái)了30多個(gè)，后來(lái)就沒(méi)有結(jié)果了~

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3樓2014-08-21 21:58:29

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xiaoweiwei121

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感覺(jué)都差不多
我一直用promega的

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4樓2014-08-22 03:28:09

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yypyy

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dai1103(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-25 22:48:06

可以試試Thermo的RevertAid或Maxima反轉(zhuǎn)錄試劑盒，用著挺不錯(cuò)的~

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5樓2014-08-25 14:36:57

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6樓: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-26 16:08:17
反轉(zhuǎn)錄時(shí)，常常由于RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的存在，導(dǎo)致結(jié)果不理想。可以考慮選擇退火溫度可至55度甚至65度的試劑盒（酶）。65度退火，正好可以讓二級(jí)結(jié)構(gòu)完全打開(kāi)。

推薦你用vazyme生物的逆轉(zhuǎn)錄酶！主要優(yōu)勢(shì)就是耐高溫，針對(duì)復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)都可以解開(kāi)！

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7樓2014-08-26 23:11:32

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6樓: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-26 16:08:17
反轉(zhuǎn)錄時(shí)，常常由于RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的存在，導(dǎo)致結(jié)果不理想�？梢钥紤]選擇退火溫度可至55度甚至65度的試劑盒（酶）。65度退火，正好可以讓二級(jí)結(jié)構(gòu)完全打開(kāi)。

那按照大俠所說(shuō)的是不是延伸溫度盡量可以高點(diǎn)呢？我用的是TAKARA的試劑盒

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生命不息奮斗不止

8樓2014-08-26 23:43:56

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8樓: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2014-08-26 23:43:56
那按照大俠所說(shuō)的是不是延伸溫度盡量可以高點(diǎn)呢？我用的是TAKARA的試劑盒...

Takara的產(chǎn)品不錯(cuò)，但并不適合高達(dá)65度這樣的反應(yīng)溫度。據(jù)我所知，市面上有兩家公司的產(chǎn)品具有類(lèi)似性能。Thermo有這樣的產(chǎn)品，推薦溫度是50度，最高聲稱可達(dá)60度；國(guó)產(chǎn)的成都福際生物有，可達(dá)65度，可以試試。不知道你在哪個(gè)城市，不一定有代理，可以搜一下。

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9樓2014-08-27 11:16:28

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冷雁孤旅

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9樓: Originally posted by johnkm66 at 2014-08-27 11:16:28
Takara的產(chǎn)品不錯(cuò)，但并不適合高達(dá)65度這樣的反應(yīng)溫度。據(jù)我所知，市面上有兩家公司的產(chǎn)品具有類(lèi)似性能。Thermo有這樣的產(chǎn)品，推薦溫度是50度，最高聲稱可達(dá)60度；國(guó)產(chǎn)的成都福際生物有，可達(dá)65度，可以試試。不知 ...

好的非常感謝

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生命不息奮斗不止

10樓2014-08-27 12:57:09

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