 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2590 | 回復(fù): 6 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
wwwpengcs銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
我的JM109-pKD46質(zhì)粒的電擊感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率怎么一直都提不上去呢 已有3人參與
|
||
| 大家好，我最近在做JM109菌株的敲除實(shí)驗(yàn)，JM109內(nèi)導(dǎo)入了一個(gè)pKD46質(zhì)粒，用10%的甘油洗了兩次。制作感受態(tài)的一些基本方面都注意到了，因?yàn)槲抑白隽撕芏嚯姄襞c熱擊的感受態(tài)，熱擊的感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率一直都非常高。我檢測(cè)我的感受態(tài)的轉(zhuǎn)化率是直接導(dǎo)入了一個(gè)與pKD46（氨芐抗性）質(zhì)粒兼容的pET-30a(卡納抗性）質(zhì)粒，用雙抗板來(lái)檢測(cè)。但是每次導(dǎo)入pET-30a質(zhì)粒后，雙抗板上要么是沒(méi)有長(zhǎng)出菌，要么是染了少許雜菌。pKD46質(zhì)粒的復(fù)制子是R101，pET-30a的復(fù)制子是pBR322�？梢钥隙ǖ氖�，這兩個(gè)質(zhì)粒是完全可以兼容的。做了一年，實(shí)驗(yàn)卡在這了，求知道的高手能夠幫我好心解答一下下~~~（金幣不多額，因?yàn)檫@是注冊(cè)3年來(lái)在蟲蟲上發(fā)的第一個(gè)帖） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有216人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 我做質(zhì)粒擴(kuò)增誘變pcr 結(jié)果正確，但是轉(zhuǎn)化進(jìn)入感受態(tài)不長(zhǎng)菌，為何？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 用試劑盒通過(guò)全質(zhì)粒PCR來(lái)做定點(diǎn)突變，導(dǎo)入不了感受態(tài)細(xì)胞，請(qǐng)幫我走出困境！
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 感受態(tài)細(xì)胞問(wèn)題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 能不能用電擊感受態(tài)細(xì)胞制備熱激感受態(tài)？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于質(zhì)粒擴(kuò)增和感受態(tài)轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化感受態(tài)后提取質(zhì)粒，測(cè)濃度總是很低
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 求助：質(zhì)粒為什么轉(zhuǎn)化感受態(tài)轉(zhuǎn)不進(jìn)去
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 感受態(tài)細(xì)胞提取的質(zhì)粒酶解后為什么帶型不一樣？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】沒(méi)有轉(zhuǎn)化過(guò)的感受態(tài)DH5a中含有質(zhì)粒嗎？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化體積為什么不能超過(guò)感受態(tài)的十分之一
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒轉(zhuǎn)化枯草桿菌感受態(tài)原理
已經(jīng)有4人回復(fù)
張凡云
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 13417.9
- 散金: 3094
- 紅花: 13
- 帖子: 4109
- 在線: 1485小時(shí)
- 蟲號(hào): 2426111
- 注冊(cè): 2013-04-19
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
| 我想問(wèn)的是，你能夠用化學(xué)轉(zhuǎn)化的方法去檢測(cè)電轉(zhuǎn)感受態(tài)？我做得是Ecoli.K12-MG1655含pKD46的電轉(zhuǎn)感受態(tài)，制作了3次感受態(tài)，第一次長(zhǎng)了2個(gè)，第二次1個(gè)，第3次長(zhǎng)得就多了，我感覺(jué)是要控制好OD600的值，在誘導(dǎo)pKD46的時(shí)候，那個(gè)值最好是在0.2~0.25之間，而最后的OD600值，不要超過(guò)0.55，還有就是你搖菌時(shí)，瓶里的溶氧量，一般是用500ml的培養(yǎng)瓶，搖100ml LB，希望對(duì)你有用。 |
4樓2015-02-03 00:46:45
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2014-08-25 16:11:27
wwwpengcs
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 224.6
- 帖子: 12
- 在線: 8.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1394477
- 注冊(cè): 2011-09-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 泌尿系統(tǒng)損傷與修復(fù)
3樓2014-08-25 21:01:22
淺語(yǔ)8905
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
- 金幣: 436.1
- 帖子: 125
- 在線: 34小時(shí)
- 蟲號(hào): 3438071
- 注冊(cè): 2014-09-24
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
5樓2015-02-03 09:25:04
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +13 | 是妍子也是研子 2026-03-30 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料化工340求調(diào)劑 +3 | jhx777 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程調(diào)劑 +8 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 071010 323 分求調(diào)劑 +3 | Baekzhy 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境科學(xué)與工程334分求調(diào)劑 +6 | 王一一依依 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程085602 305分求調(diào)劑 +25 | RichLi_ 2026-03-25 | 25/1250 |
|
|
|
[考研] 375求調(diào)劑 +6 | 雨夏整夜 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +10 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | dfffsar 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070305高分子化學(xué)與物理 304分求調(diào)劑 +12 | c297914 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +10 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 種圣賜 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑
+10
|
y7czhao 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 315調(diào)劑 +4 | 0860求調(diào)劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +17 | 碩星赴 2026-03-23 | 17/850 |
|