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630529612木蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于ELISA試劑盒的線性范圍問題 已有3人參與
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最近在做ELISA試劑盒的定量，遇到了一些問題，在這和大家交流一下。望各位同仁不吝賜教！ 做定量要驗證試劑盒的線性范圍，目前我的盒子線性范圍太窄——線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為16。我嘗試了改變反應(yīng)模式，將線性范圍略擴(kuò)寬了一些——線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為32。如果高點(diǎn)往上一個梯度延伸，則R平方就只有0.96（已經(jīng)是最好的結(jié)果了）�？偟膩碚f線性范圍還是太窄。我參考了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒，基本上線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值都≥64。我知道,ELISA的信號值范圍窄，但我想線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值≥64應(yīng)該還是可以的。我想請教一下各位戰(zhàn)友如何才能將試劑盒的線性范圍擴(kuò)寬？我搜索了論壇沒有找到相關(guān)帖，那么就從這個帖子開始，我們一塊討論一下吧。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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幫頂一下。 關(guān)于ELISA的線性范圍問題 http://www.docin.com/p-186171796.html |
2樓2014-09-03 08:16:59
wkh310
木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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630529612: 金幣+20, ★★★很有幫助 2014-09-08 22:19:54
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630529612: 金幣+20, ★★★很有幫助 2014-09-08 22:19:54
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線性范圍的影響有兩個因素：1、本身抗體的親和力，親和力越高靈敏度越高，高點(diǎn)與低點(diǎn)比值也就越高，若標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率接近于1，抗體親和力還是可以的。比值沒有相關(guān)規(guī)定說一定要高于64。 2、本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同，線性范圍也不同，如果你的項目在某一濃度達(dá)到平臺值，說明這個蛋白與其抗體結(jié)合與解離在此濃度下達(dá)到了平衡，改變其他條件也無法增加，除非改用化學(xué)發(fā)光法。若是同一種蛋白其線性范圍沒有其他盒子做的高，可嘗試改變條件降低其背景值從而降低低濃度來提高比值。 |
4樓2014-09-03 15:34:59
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