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中庸001金蟲 (小有名氣)
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[求助]
ELISA結(jié)果分析 已有1人參與
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ELISA實驗結(jié)果 0為對照 1沒有任何物品 2、3、4管的抗原濃度依次遞增，出現(xiàn)的結(jié)果如此亂，求大神分析 0IO$DQU2ACSY6$3]{66]LR4.jpg |
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5樓2014-06-05 11:59:35
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
中庸001: 金幣+3, ★有幫助 2014-06-07 20:39:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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標(biāo)記HRP，底物不是TMB+過氧化物，如果是這個底物的話，單波長檢測應(yīng)該是450，雙波長是450+630的，為什么你的會是492的？ 感覺你的實驗設(shè)計本身就有點問題。整個實驗，根據(jù)你的實驗操作和我過往的經(jīng)驗，我認(rèn)為是摸索合適的抗原包被濃度。為了這樣的實驗?zāi)康模視徊煌乖瓭舛忍荻龋?.1μg/mL~5μg/mL）的反應(yīng)板，包被、封閉之后，就正式開始實驗，然后把一抗稀釋成兩個（陰性和陽性）或多個（梯度稀釋，加零濃度點）濃度，加到反應(yīng)板里孵育，孵育完了就洗板，加酶標(biāo)二抗，在孵育，這次孵育完了以后，洗板加顯色液。 對于你這個結(jié)果，可以說這次試驗是廢了。雖然是不同抗原濃度，有不同的OD值，但陽性的OD值太低了，連0.1都不要，可能的原因有： 1、檢測的波長不對； 2、抗原沒有包被到反應(yīng)板上； 3,、抗原跟一抗沒反應(yīng)； 4、一抗跟二抗沒反應(yīng)； 5、二抗沒有標(biāo)記酶；（可能性不大） 6、顯色液的有問題：配制出問題了，或不是合適的顯色液； 總的來說，這樣的數(shù)據(jù)是沒辦法分析的，只能是重新做實驗，看看是哪部分出問題了。 |
10樓2014-06-06 12:58:35
【答案】應(yīng)助回帖
|
想要弄清實驗失敗的原因，那就要你自己去對比分析了。 成功實驗和失敗實驗使用的試劑，完全一樣（指同時配制）的話，那就可能是在實驗?zāi)骋徊讲僮髦谐霈F(xiàn)了問題，這就要你自己查看實驗記錄或仔細(xì)回憶兩次實驗之間的操作有什么不一樣的了。如果試劑不是同時配制的話，就更加要注意試劑有沒有配制錯誤了。 失敗和成功的實驗，整個過程中，肯定會有一點差異的東西，那一點差異就導(dǎo)致了你之前的實驗失敗。 最后，如果這樣還不能找到實驗失敗的原因的話，那就記錄成功實驗的每個步驟，保證以后的實驗都是成功的，并詳細(xì)做好實驗記錄，方便自己對實驗結(jié)果進行分析，并避免因為同樣的原因而導(dǎo)致實驗失敗！ |
12樓2014-06-07 18:52:18
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2樓2014-06-03 21:35:38
3樓2014-06-05 00:01:33
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4樓2014-06-05 08:57:24
6樓2014-06-05 12:00:54
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7樓2014-06-05 15:18:35
8樓2014-06-05 17:06:07
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9樓2014-06-06 10:58:37
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