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中庸001金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
ELISA結(jié)果分析 已有1人參與
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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果 0為對(duì)照 1沒(méi)有任何物品 2、3、4管的抗原濃度依次遞增，出現(xiàn)的結(jié)果如此亂，求大神分析 0IO$DQU2ACSY6$3]{66]LR4.jpg |
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5樓2014-06-05 11:59:35
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
中庸001: 金幣+3, ★有幫助 2014-06-07 20:39:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
中庸001: 金幣+3, ★有幫助 2014-06-07 20:39:58
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標(biāo)記HRP，底物不是TMB+過(guò)氧化物，如果是這個(gè)底物的話，單波長(zhǎng)檢測(cè)應(yīng)該是450，雙波長(zhǎng)是450+630的，為什么你的會(huì)是492的？ 感覺(jué)你的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本身就有點(diǎn)問(wèn)題。整個(gè)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)操作和我過(guò)往的經(jīng)驗(yàn)，我認(rèn)為是摸索合適的抗原包被濃度。為了這樣的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，我�?huì)包被不同抗原濃度梯度（0.1μg/mL~5μg/mL）的反應(yīng)板，包被、封閉之后，就正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，然后把一抗稀釋成兩個(gè)（陰性和陽(yáng)性）或多個(gè)（梯度稀釋?zhuān)恿銤舛赛c(diǎn)）濃度，加到反應(yīng)板里孵育，孵育完了就洗板，加酶標(biāo)二抗，在孵育，這次孵育完了以后，洗板加顯色液。 對(duì)于你這個(gè)結(jié)果，可以說(shuō)這次試驗(yàn)是廢了。雖然是不同抗原濃度，有不同的OD值，但陽(yáng)性的OD值太低了，連0.1都不要，可能的原因有： 1、檢測(cè)的波長(zhǎng)不對(duì)； 2、抗原沒(méi)有包被到反應(yīng)板上； 3,、抗原跟一抗沒(méi)反應(yīng)； 4、一抗跟二抗沒(méi)反應(yīng)； 5、二抗沒(méi)有標(biāo)記酶；（可能性不大） 6、顯色液的有問(wèn)題：配制出問(wèn)題了，或不是合適的顯色液； 總的來(lái)說(shuō)，這樣的數(shù)據(jù)是沒(méi)辦法分析的，只能是重新做實(shí)驗(yàn)，看看是哪部分出問(wèn)題了。 |
10樓2014-06-06 12:58:35
【答案】應(yīng)助回帖
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想要弄清實(shí)驗(yàn)失敗的原因，那就要你自己去對(duì)比分析了。 成功實(shí)驗(yàn)和失敗實(shí)驗(yàn)使用的試劑，完全一樣（指同時(shí)配制）的話，那就可能是在實(shí)驗(yàn)?zāi)骋徊讲僮髦谐霈F(xiàn)了問(wèn)題，這就要你自己查看實(shí)驗(yàn)記錄或仔細(xì)回憶兩次實(shí)驗(yàn)之間的操作有什么不一樣的了。如果試劑不是同時(shí)配制的話，就更加要注意試劑有沒(méi)有配制錯(cuò)誤了。 失敗和成功的實(shí)驗(yàn)，整個(gè)過(guò)程中，肯定會(huì)有一點(diǎn)差異的東西，那一點(diǎn)差異就導(dǎo)致了你之前的實(shí)驗(yàn)失敗。 最后，如果這樣還不能找到實(shí)驗(yàn)失敗的原因的話，那就記錄成功實(shí)驗(yàn)的每個(gè)步驟，保證以后的實(shí)驗(yàn)都是成功的，并詳細(xì)做好實(shí)驗(yàn)記錄，方便自己對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，并避免因?yàn)橥瑯拥脑蚨鴮?dǎo)致實(shí)驗(yàn)失��！ |
12樓2014-06-07 18:52:18
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2樓2014-06-03 21:35:38
3樓2014-06-05 00:01:33
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4樓2014-06-05 08:57:24
6樓2014-06-05 12:00:54
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7樓2014-06-05 15:18:35
8樓2014-06-05 17:06:07
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9樓2014-06-06 10:58:37
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