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freerf新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
磁珠試劑盒提取細(xì)胞中DNA 已有2人參與
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求推薦適合的相應(yīng)的磁珠提取DNA試劑盒，要求如下： 1.提取動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中的基因組DNA； 2.磁珠粒徑最好為nm級(jí)； 3.手提； 4.請(qǐng)指出試劑盒中哪一步去除蛋白質(zhì)、哪一步去除RNA、磁珠洗脫的條件控制~~ 這幾個(gè)月一直在摸索中、還是一頭霧水。  謝謝，請(qǐng)大仙指教~~~  |
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 磁珠 |
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zhangyunjing
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
freerf(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-09-12 10:39:48
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你是要研發(fā)磁珠法DNA抽提試劑盒嗎？ 1.關(guān)于抽提的細(xì)胞中的基因組DNA，首先你要找到合適的裂解液。 2. 磁珠粒徑不是關(guān)鍵，關(guān)鍵的是你選的磁珠磁吸附力好，而且結(jié)合DNA分子的特異性強(qiáng)，結(jié)合時(shí)間短，一般用于核酸提取的磁珠的粒徑在1 uM左右。 3. 手提的話(huà)需要磁力架，生工有賣(mài)的，很便宜 4. 去除蛋白、RNA等要在磁珠結(jié)合DNA步驟之前，否則磁珠也會(huì)結(jié)合RNA分子 5. 關(guān)于磁珠洗脫條件的控制，因磁珠而異，不同的磁珠洗脫條件差別還是很大的 |
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4樓2014-09-12 10:14:59
zhangyunjing
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【答案】應(yīng)助回帖
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freerf: 金幣+30, ★★★很有幫助, 謝謝~~我周一咨詢(xún)下商家 2014-09-13 20:42:22
freerf: 金幣+30, ★★★很有幫助, 謝謝~~我周一咨詢(xún)下商家 2014-09-13 20:42:22
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1. 我用的是上海生工的磁珠法動(dòng)物組織DNA抽提試劑盒，產(chǎn)品編號(hào)是SK8721。 2. 關(guān)于你提到的無(wú)需洗脫直接以磁珠為模板，進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，我們用過(guò)生工的磁珠法質(zhì)粒抽提試劑盒，磁珠經(jīng)過(guò)洗滌和干燥之后，直接加入PCR反應(yīng)體系所需要的組分，然后以磁珠為模板，進(jìn)行PCR，確實(shí)能夠擴(kuò)增出目的條帶，而且條帶挺亮的。 3. 不知道你用下游做什么實(shí)驗(yàn)。 4.關(guān)于洗脫條件的問(wèn)題，不同的磁珠洗脫條件有差別的，這與磁珠的性質(zhì)有關(guān)，有的磁珠需要高溫水浴洗脫，洗脫過(guò)程中間或混勻；有的磁珠常溫洗脫效率也很好，就看你用的是哪家公司的磁珠了。 5. 關(guān)于你提到的DNA得率低的問(wèn)題，如果是你自己買(mǎi)的磁珠做的話(huà)，需要自己摸索最佳的結(jié)合條件，包括結(jié)合液的組分和結(jié)合時(shí)間，如果結(jié)合效率很低的話(huà)，你的得率自然也很低，建議你買(mǎi)成熟的磁珠法試劑盒，自己摸索需要很久的時(shí)間的。 6. 關(guān)于磁珠法DNA提取建議你打電話(huà)到生工咨詢(xún)一下，他們對(duì)這方面的研究還是挺深入的。 |
10樓2014-09-12 16:20:41
2樓2014-09-12 08:17:20
3樓2014-09-12 10:06:15
freerf
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5樓2014-09-12 10:24:32
freerf
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送紅花一朵 |
謝謝，您的解答對(duì)我很有啟發(fā)。 關(guān)于2. 我是需要用這種試劑盒、用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求磁珠的粒徑盡量小。后續(xù)實(shí)驗(yàn)其實(shí)不需要洗脫這一步、帶著磁珠直接做，但因我要考查整個(gè)實(shí)驗(yàn)的提取效果，需要洗脫下來(lái)用nano drop測(cè)定提出DNA的量（以我目前的知識(shí)儲(chǔ)備，只能想到這種方法測(cè)定提取效果）。 關(guān)于5. 我看到不同公司的試劑盒，有的需要高溫渦旋進(jìn)行洗脫、有的只需要高溫洗脫液就能洗脫，總感覺(jué)這些方法不靠譜、實(shí)際操作的確發(fā)現(xiàn)提取DNA的量很小。 |
6樓2014-09-12 10:32:48
freerf
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7樓2014-09-12 10:36:53
freerf
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8樓2014-09-12 16:01:51
freerf
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9樓2014-09-12 16:05:09
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