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馬納納0713新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
克隆未知基因 已有3人參與
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| 大家好! 我最近在做PCR,但是我有一個(gè)基因5‘端序列已知,3’端序列未知,F(xiàn)在提取物種RNA后已經(jīng)反轉(zhuǎn)錄成cDNA,想請(qǐng)問(wèn)大神們對(duì)于已知5‘端序列的基因該怎么辦才可以得到完整基因?不想用RACE試劑盒那樣麻煩。新手入門,請(qǐng)多多知指教!謝謝 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
| 其實(shí),3'RACE并不麻煩,比5‘RACE簡(jiǎn)單多了,如果你基因不長(zhǎng)的話,把outer、inner引物都設(shè)計(jì)在起始密碼子前,這樣直接就能得到全長(zhǎng)編碼區(qū)。真想偷懶,可以直接在5'端起始密碼子前設(shè)計(jì)上游引物,搭配oligo dT引物進(jìn)行擴(kuò)增,碰運(yùn)氣吧,不過(guò)我不建議這樣做,擴(kuò)不出來(lái)還是得做RACE,還是穩(wěn)扎穩(wěn)打的來(lái)保險(xiǎn)。 |
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新蟲(chóng) (初入文壇)
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[基金申請(qǐng)]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC,還能修改嗎?
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