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我聽(tīng)五月天木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
細(xì)胞最近總是染菌，幫忙分析一下什么原因？
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最近染菌的情況都一樣，培基不變臭，只變黃。高倍數(shù)下，細(xì)胞焦平面能看到小白線高速轉(zhuǎn)動(dòng)、游動(dòng)，培基很渾濁的時(shí)候小白線是抱團(tuán)的。 最近的變量 1、干粉配置的培基換成了塑料瓶現(xiàn)成培基，燒瓶口不敢很猛了。 2、以前給藥后，96孔板都一般都正常，最近有時(shí)有幾個(gè)孔染菌，有時(shí)候整個(gè)板子染菌。 3、每次染菌都是一瓶培基用過(guò)幾次之后，快用完時(shí)最明顯。剛加好血清用幾次都沒(méi)出現(xiàn)問(wèn)題。 4、貌似一年多沒(méi)給超凈臺(tái)換高效濾膜了。 5、復(fù)蘇細(xì)胞第一天好的，換液后，第二天就染菌。 懷疑 1、培基質(zhì)量問(wèn)題。cyagen的液體培養(yǎng)基。----估計(jì)培基有問(wèn)題可能不大 2、操作問(wèn)題。但是絕對(duì)沒(méi)有手在瓶口上經(jīng)過(guò)的類似低級(jí)錯(cuò)誤。 3、超凈臺(tái)需要換膜？ 4、細(xì)胞室太臟需要熏蒸？ |
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培養(yǎng)細(xì)胞注意的事項(xiàng)太多，不過(guò)只要操作熟練注意關(guān)鍵的介個(gè)步驟應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。 1、滅菌物品一定要滅菌徹底，你注意一下你使用的器具，像移液管、槍頭、配培養(yǎng)基用的玻璃瓶等等，確保無(wú)菌，滅好的器具如果長(zhǎng)時(shí)間不用也是容易長(zhǎng)菌的。 2、操作時(shí)一定要秉承只有是無(wú)菌的東西才能往超凈臺(tái)里拿的原則。 3、個(gè)人覺(jué)得養(yǎng)細(xì)胞不是件困難的事兒，唯一需要的就是細(xì)心!我建議你把所有需要的東西重新滅菌，培養(yǎng)基、血清、雙抗什么的都用新的，操作時(shí)每一個(gè)步驟都注意一點(diǎn)，慢一點(diǎn)，在這個(gè)過(guò)程中你就可以發(fā)現(xiàn)問(wèn)題出在哪里！ |
2樓2014-09-17 16:53:47
我聽(tīng)五月天
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3樓2014-09-17 21:50:46
xipha
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【答案】應(yīng)助回帖
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我聽(tīng)五月天: 金幣+7, ★★★很有幫助 2014-09-18 07:37:14
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1、干粉配置的培基換成了塑料瓶現(xiàn)成培基，燒瓶口不敢很猛了。 我覺(jué)得細(xì)胞房每個(gè)星期要清洗, 做實(shí)驗(yàn)要干凈利落,但是還是不要用酒精燈燒了. 首先溫度就不是很夠,然后時(shí)間也完全不夠. 只是增加污染的機(jī)會(huì)而已. 2、以前給藥后，96孔板都一般都正常，最近有時(shí)有幾個(gè)孔染菌，有時(shí)候整個(gè)板子染菌。 沒(méi)染菌的孔有什么規(guī)律么? 3、每次染菌都是一瓶培基用過(guò)幾次之后，快用完時(shí)最明顯。剛加好血清用幾次都沒(méi)出現(xiàn)問(wèn)題。 懷疑是操作帶來(lái)的污染. 水浴, 超凈臺(tái), 吸管. 4、貌似一年多沒(méi)給超凈臺(tái)換高效濾膜了。 這個(gè)有可能. 5、復(fù)蘇細(xì)胞第一天好的，換液后，第二天就染菌。 這個(gè)不說(shuō)明什么, 第一天要是有細(xì)菌可能也還沒(méi)長(zhǎng)起來(lái). 建議樓主找找附近實(shí)驗(yàn)室的人看看樓主的設(shè)施和看樓主做一遍細(xì)胞,看看是哪里出了問(wèn)題. |
4樓2014-09-18 02:56:38
我聽(tīng)五月天
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5樓2014-09-18 16:06:49
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做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)條件等一般是可以嚴(yán)格一致的，但是有兩個(gè)東西是很難控制的，那就是細(xì)胞的狀態(tài)和化合物的穩(wěn)定性。 1、細(xì)胞傳的代數(shù)越多，變異的可能性越大，我自己就遇到過(guò)這樣的問(wèn)題，所以我們實(shí)驗(yàn)室的原則是，細(xì)胞傳代到一定的代數(shù)就直接扔掉不要了。 2、化合物的穩(wěn)定性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也有很大的影響，你重復(fù)不出實(shí)驗(yàn)結(jié)果也有可能是化合物的變化造成的。 你自己根據(jù)具體情況再找找原因吧！ |
6樓2014-09-18 16:26:41
xipha
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一般細(xì)胞用耗材都是一次性, 或者滅過(guò)菌的器具. 出現(xiàn)污染很有可能是超凈臺(tái),水浴鍋,孵育箱染菌了. 以超凈臺(tái),孵育箱最為常見(jiàn). 操作染菌的可能還有一種就是你的袖子. 你可以用巴氏消毒液殺殺超凈臺(tái),孵育箱 這個(gè)一般一個(gè)月一次清潔細(xì)胞房的時(shí)候一起處理, 孵育箱水盤(pán)和水浴鍋也是每月洗一洗換水完往里面加一點(diǎn)抗生素, 或者有買(mǎi)專門(mén)供細(xì)胞房滅菌的噴劑和藥劑來(lái)處理超凈臺(tái),水浴鍋,孵育箱.細(xì)胞用實(shí)驗(yàn)服建議專用,兩到三周洗一次. |
7樓2014-09-19 02:11:26
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