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我聽五月天木蟲 (正式寫手)
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[求助]
細胞最近總是染菌，幫忙分析一下什么原因？
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最近染菌的情況都一樣，培基不變臭，只變黃。高倍數(shù)下，細胞焦平面能看到小白線高速轉(zhuǎn)動、游動，培基很渾濁的時候小白線是抱團的。 最近的變量 1、干粉配置的培基換成了塑料瓶現(xiàn)成培基，燒瓶口不敢很猛了。 2、以前給藥后，96孔板都一般都正常，最近有時有幾個孔染菌，有時候整個板子染菌。 3、每次染菌都是一瓶培基用過幾次之后，快用完時最明顯。剛加好血清用幾次都沒出現(xiàn)問題。 4、貌似一年多沒給超凈臺換高效濾膜了。 5、復(fù)蘇細胞第一天好的，換液后，第二天就染菌。 懷疑 1、培基質(zhì)量問題。cyagen的液體培養(yǎng)基。----估計培基有問題可能不大 2、操作問題。但是絕對沒有手在瓶口上經(jīng)過的類似低級錯誤。 3、超凈臺需要換膜？ 4、細胞室太臟需要熏蒸？ |
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xipha
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
我聽五月天: 金幣+7, ★★★很有幫助 2014-09-18 07:37:14
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我聽五月天: 金幣+7, ★★★很有幫助 2014-09-18 07:37:14
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1、干粉配置的培基換成了塑料瓶現(xiàn)成培基，燒瓶口不敢很猛了。 我覺得細胞房每個星期要清洗, 做實驗要干凈利落,但是還是不要用酒精燈燒了. 首先溫度就不是很夠,然后時間也完全不夠. 只是增加污染的機會而已. 2、以前給藥后，96孔板都一般都正常，最近有時有幾個孔染菌，有時候整個板子染菌。 沒染菌的孔有什么規(guī)律么? 3、每次染菌都是一瓶培基用過幾次之后，快用完時最明顯。剛加好血清用幾次都沒出現(xiàn)問題。 懷疑是操作帶來的污染. 水浴, 超凈臺, 吸管. 4、貌似一年多沒給超凈臺換高效濾膜了。 這個有可能. 5、復(fù)蘇細胞第一天好的，換液后，第二天就染菌。 這個不說明什么, 第一天要是有細菌可能也還沒長起來. 建議樓主找找附近實驗室的人看看樓主的設(shè)施和看樓主做一遍細胞,看看是哪里出了問題. |
4樓2014-09-18 02:56:38
風信子尋夢
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培養(yǎng)細胞注意的事項太多，不過只要操作熟練注意關(guān)鍵的介個步驟應(yīng)該不會出現(xiàn)問題。 1、滅菌物品一定要滅菌徹底，你注意一下你使用的器具，像移液管、槍頭、配培養(yǎng)基用的玻璃瓶等等，確保無菌，滅好的器具如果長時間不用也是容易長菌的。 2、操作時一定要秉承只有是無菌的東西才能往超凈臺里拿的原則。 3、個人覺得養(yǎng)細胞不是件困難的事兒，唯一需要的就是細心!我建議你把所有需要的東西重新滅菌，培養(yǎng)基、血清、雙抗什么的都用新的，操作時每一個步驟都注意一點，慢一點，在這個過程中你就可以發(fā)現(xiàn)問題出在哪里！ |
2樓2014-09-17 16:53:47
我聽五月天
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3樓2014-09-17 21:50:46
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5樓2014-09-18 16:06:49
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