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llp1030新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌RED基因敲除4個(gè)月總是得不到陽(yáng)性克隆，求大神指導(dǎo)�。�！
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最近一直在做大腸桿菌的基因敲除，可是4個(gè)月一個(gè)基因都沒(méi)敲下來(lái)，總是電轉(zhuǎn)后得不到陽(yáng)性克隆，也就是說(shuō)抗性片段沒(méi)有整合到染色體上，卡在這一步�。。� 制取的片段應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題，感受態(tài)制作是大腸桿菌K12（PKD46），電擊條件：2.5KV,5ms,2mm電轉(zhuǎn)杯，電擊后37度后培養(yǎng)1.5小時(shí)涂板，可是長(zhǎng)出的單菌落都是假陽(yáng)性的。 |
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林默淚
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