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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 質粒圖譜與閱讀框問題
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xulinan木蟲 (小有名氣)
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[求助]
質粒圖譜與閱讀框問題 已有1人參與
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有兩個問題請教下。 1. 我們克隆基因到一個質粒上的時候，通常引物設計是酶切位點+His tag（如果純化）+目的基因， 但是現在的問題是老師給了一個很奇怪的序列，His tag和目的基因都有，但是Histag前還多出來一些序列，并且這些堿基不是3的整數倍，他讓我用不同的酶切位點克隆到另一個質粒上，我就想如果直接按他的要求直接克隆這個序列是不是翻譯的時候就框移了，因為明顯的His tag前面多的幾個堿基不是3的倍數啊，困惑中，又不好意思直接去找老師說他給的序列不對。請問這種情況是否會發(fā)生翻譯時候框移？謝謝 2. 據說如果用p413這種質粒是不存在翻譯時框移現象的，請問這是為什么？p413圖譜見下，而且看起來這個圖譜中promoter是在XbaI一側啊，但是如果用XbaI/EcoRI這對酶切的話，會把EcoRI設計到Forword primer中，這個我又迷惑了，方向雖然看著兩頭都行，但是terminator明顯在EcoRI這側啊？EcoRI設計到Forword primer中克隆進去的基因不就放了嗎？一直對基因復制的各種方向搞不清楚，請大家點播一二，謝謝。 413.jpg |
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