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[求助]
高CG重復和連續(xù)序列怎么P出來 已有3人參與
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1. 以下是我打算P的序列，引物設計決不是問題，但就是P不出來，一次P出來了大小還不對，求幫助 ttaaccctagaaagataatcatattgtgacgtacgttaaagataatcatgcgtaaaattgacgcatgtgttttatcggtctgtatatcgaggtttatttattaatttgaatagatattaagttttattatatttacacttacatactaataataaattcaacaaacaatttatttatgtttatttatttattaaaaaaaaacaaaaactcaaaatttcttctataaagtaacaaa 2. 下面這一段也是要P的，目的應該有800bp左右，但就是總P出300bp左右的條帶。檢查引物特異性，也沒得說，好的很 cgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattgtgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcggggggggggggggggcgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagtcgctgcgacgctgccttcgccccgtgccccgctccgccgccgcctcgcgccgcccgccccggctctgactgaccgcgttactcccacaggtgagcgggcgggacggcccttctcctccgggctgtaattagctgagcaagaggtaagggtttaagggatggttggttggtggggtattaatgtttaattacctggagcacctgcctgaaatcactttttttcaggttgg。非常高的連續(xù)G或C。 |
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4樓2014-10-07 00:53:52
jonew
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5樓2014-10-07 11:17:09
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我猜你這是鏈霉菌的模板 一定要用GC buffer TAKARA有兩種： GC I 和GC II， 先用I試一下， 實在不行再用II，DMSO是必須加的，濃度是50ul體系里面加2.5的DMSO 還有就是退火溫度要低 （我最低到40度） 我做過模板GC含量都在80以上的 就要這些方法 引物隨便設 基因擴出來基本都是一條目的條帶 擴過12Kb的高GC片段 一樣好用 祝好運 |
6樓2014-10-07 11:32:10
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