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我聽(tīng)五月天

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[求助] 用HPLC監(jiān)控紫杉醇的DMSO溶液濃度會(huì)不會(huì)隨時(shí)間變化，應(yīng)該用峰面積還是峰高作參考？已有7人參與

實(shí)驗(yàn)需要用的紫杉醇DMSO溶液，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋使用，為了保證溶液質(zhì)量，每次使用時(shí)用HPLC檢測(cè)紫杉醇濃度。
查了文獻(xiàn)后決定條件定為
56微克/毫升的溶液進(jìn)樣5微升;
1毫升每分鐘，乙腈/水=35/65;
25-40度不控制溫度;
檢測(cè)器227納米。
文獻(xiàn)里10分鐘以后出峰，我做的2.6分鐘出峰，峰高接近3000，面積5.7*e4。連續(xù)進(jìn)了三次樣，結(jié)果一致性很好。
緊接著沒(méi)有平衡就換成乙腈/水=25/75（好久不做液相了，為了讓他晚點(diǎn)兒出峰竟然。。。）進(jìn)樣一次，2.6分鐘出峰，峰高接近3000，面積4.0*e4。
。。。。。。。。。。。。
過(guò)了一星期多，用乙腈/水=35/65，2.6分鐘出峰，峰高接近3000，面積4.7*e4.
額。。。醉了，不知道怎么判定濃度了。

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1樓 2014-10-12 08:38:48

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樓主好估計(jì)你三次觀察到的峰都是溶劑峰，不可能是紫杉醇的峰，在你的條件下出峰時(shí)間不會(huì)這么早的，除非是UPLC，HPLC一般會(huì)控制出峰時(shí)間在3分鐘以后，我做的一般控制在5分鐘左右以后；建議樓主，運(yùn)行時(shí)間延長(zhǎng)（柱子短可以走到25分鐘試試看，長(zhǎng)柱子建議走40分鐘以上）試試看，尤其是色譜柱是250mm時(shí)，最好用個(gè)梯度，最后把乙腈比例調(diào)為90%走了看看。

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2樓2014-10-12 09:02:41

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補(bǔ)充一個(gè)問(wèn)題，定量肯定使用峰面積，用峰高的很少，峰高要求峰的對(duì)稱(chēng)性在0.95 - 1.05之間，這個(gè)要求有點(diǎn)高了。

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3樓2014-10-12 09:25:50

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liwentao2010

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【答案】應(yīng)助回帖

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我聽(tīng)五月天: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-10-12 11:08:37

建議樓主重新考慮一下流動(dòng)相配制，前幾分鐘雜峰比較多，干擾性強(qiáng)，最好出峰時(shí)間再向后延遲一些。此外，峰高或峰面積都可以作為標(biāo)準(zhǔn)判斷，比如UV依賴(lài)于吸光度值等，但是這與物質(zhì)種類(lèi)有關(guān)，若是峰型好，規(guī)則而峰尖，都可以，反之最好選擇積分面積比較好一些。（個(gè)人看法，僅供參考）

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加油！

4樓2014-10-12 09:53:36

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yemu159

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DMSO不能做液相的溶劑，2.6分鐘可能是DMSO的溶劑峰。

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20樓2014-10-14 09:26:38

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4樓: Originally posted by liwentao2010 at 2014-10-12 09:53:36
建議樓主重新考慮一下流動(dòng)相配制，前幾分鐘雜峰比較多，干擾性強(qiáng)，最好出峰時(shí)間再向后延遲一些。此外，峰高或峰面積都可以作為標(biāo)準(zhǔn)判斷，比如UV依賴(lài)于吸光度值等，但是這與物質(zhì)種類(lèi)有關(guān)，若是峰型好，規(guī)則而峰尖，都 ...

跟我在其他地方看到的說(shuō)法一樣！謝謝。峰型不尖

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5樓2014-10-12 11:09:42

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2樓: Originally posted by klicking at 2014-10-12 09:02:41
樓主好估計(jì)你三次觀察到的峰都是溶劑峰，不可能是紫杉醇的峰，在你的條件下出峰時(shí)間不會(huì)這么早的，除非是UPLC，HPLC一般會(huì)控制出峰時(shí)間在3分鐘以后，我做的一般控制在5分鐘左右以后；建議樓主，運(yùn)行時(shí)間延長(zhǎng)（柱子 ...

謝謝！我用的250mm柱子。我前面提到了連續(xù)進(jìn)樣四次的，每次都是走了10分鐘多，沒(méi)有出現(xiàn)別的峰。。。也是不能說(shuō)明這是紫杉醇�。�？

我再試試

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6樓2014-10-12 11:18:11

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6樓: Originally posted by 我聽(tīng)五月天 at 2014-10-12 11:18:11
謝謝！我用的250mm柱子。我前面提到了連續(xù)進(jìn)樣四次的，每次都是走了10分鐘多，沒(méi)有出現(xiàn)別的峰。。。也是不能說(shuō)明這是紫杉醇�。�？

我再試試...

是的，把把運(yùn)行時(shí)間延長(zhǎng)一下看看，我看文獻(xiàn)在5-25分鐘出峰，流動(dòng)相有用到80比例的

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7樓2014-10-12 11:21:00

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用峰面積作為判定的標(biāo)準(zhǔn)。你這種情況建議使用梯度洗脫。

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雲(yún)幕低垂映桂子，江月留白問(wèn)柳心。

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