 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 1786 | 回復: 13 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
HX91926銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
麻煩問一下實驗室做表達經(jīng)常不成功是怎么回事 已有8人參與
|
||
|
實驗室做的都是基因克隆，轉(zhuǎn)化，然后表達，實驗室比較新，也不太有錢，大家所有的步驟都是一樣的，用的都是pet-28a（+）質(zhì)粒，剪切酶都是BamHⅠ、HindⅢ，都是導入到bl21（d3）中，表達都是用iptg誘導，但是據(jù)我所知，往屆的學姐學長們，表達做出來的都很少，大部分都是做到轉(zhuǎn)化成功，然后做不出來，換題了。 現(xiàn)在我做自己的題也是，到轉(zhuǎn)化怎么也不成功，我們這一屆5個人，就一個人成功了，從轉(zhuǎn)化開始各種條件我感覺都做過了，就是看不到條帶 這是不是通病啊，問題會不會出在構建體系和轉(zhuǎn)化體系部分。好像我們老師并沒有換體系的意思啊，咋辦 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有271人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
hymark2003
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 12333.3
- 帖子: 1129
- 在線: 137小時
- 蟲號: 477932
- 注冊: 2007-12-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物、醫(yī)學光子學
11樓2014-10-17 09:55:56
2樓2014-10-14 10:34:39
yonglu
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 254.6
- 帖子: 23
- 在線: 7.5小時
- 蟲號: 822937
- 注冊: 2009-08-06
- 專業(yè): 基因表達調(diào)控與表觀遺傳學
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-10-16 11:15:24
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-10-16 11:15:24
| 這個原因太多了。首先，要轉(zhuǎn)化進入細胞之前，肯定是構建含正確目標序列的表達載體。怎么驗證你的表達載體構建正確了？酶切，測序，PCR擴增等方法。這些都沒有問題嗎？如果一切OK，那么就考慮是否是要轉(zhuǎn)化的細胞沒有處理好感受態(tài)，根本就沒轉(zhuǎn)進去呢？轉(zhuǎn)化后的培養(yǎng)，相比也設置了，陰性對照（空的轉(zhuǎn)化細胞），陽性對照（含空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化細胞），以及含有你表達序列的轉(zhuǎn)化細胞。三種同時培養(yǎng)，都有細胞篩選出來嗎？后期驗證的時候，當然也是要陽性對照和目的條帶一起PCR驗證了。涉及到的操作步驟較多，試劑也多，建議還是要仔細審查每一步驟，確保每一步操作都正確吧。 |
3樓2014-10-14 11:23:05
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時
- 蟲號: 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學
4樓2014-10-14 11:34:17
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學 ，080500材料科學與工程學碩，總分289分 +7 | @taotao 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +8 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +11 | Mr. Z 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑，求導師收 +9 | 天天好運來上岸?/a> 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +7 | min3 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085602 307分 求調(diào)劑 +7 | 不知道叫什么！ 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 070300化學求調(diào)劑 +4 | 起個名咋這么難 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研]
 一志愿 西北大學 總分282 英語一62 求調(diào)劑
+7
|
18419759900 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +12 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學一志愿南京師范大學303求調(diào)劑 +3 | zzffylgg 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大化學322求調(diào)劑 +4 | 17501029541 2026-03-23 | 6/300 |
|