 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1780 | 回復(fù): 13 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
HX91926銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
麻煩問一下實(shí)驗(yàn)室做表達(dá)經(jīng)常不成功是怎么回事 已有8人參與
|
||
|
實(shí)驗(yàn)室做的都是基因克隆，轉(zhuǎn)化，然后表達(dá)，實(shí)驗(yàn)室比較新，也不太有錢，大家所有的步驟都是一樣的，用的都是pet-28a（+）質(zhì)粒，剪切酶都是BamHⅠ、HindⅢ，都是導(dǎo)入到bl21（d3）中，表達(dá)都是用iptg誘導(dǎo)，但是據(jù)我所知，往屆的學(xué)姐學(xué)長們，表達(dá)做出來的都很少，大部分都是做到轉(zhuǎn)化成功，然后做不出來，換題了。 現(xiàn)在我做自己的題也是，到轉(zhuǎn)化怎么也不成功，我們這一屆5個人，就一個人成功了，從轉(zhuǎn)化開始各種條件我感覺都做過了，就是看不到條帶 這是不是通病啊，問題會不會出在構(gòu)建體系和轉(zhuǎn)化體系部分。好像我們老師并沒有換體系的意思啊，咋辦 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有276人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助�。�！質(zhì)粒轉(zhuǎn)化一直不成功
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 實(shí)驗(yàn)室測定固體食品的菌落總數(shù)時要注意些什么
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 蛋白表達(dá)及純化
已經(jīng)有29人回復(fù)
- PBI121載體酶切后回收
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，接觸到管式爐，弱弱的問一下，管式爐煅燒的目的是什么啊。
已經(jīng)有3人回復(fù)
- pET-30a(+)不表達(dá)
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 蛋白表達(dá)不出來是怎么回事？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】請教個關(guān)于inverse PCR的問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
yonglu
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 254.6
- 帖子: 23
- 在線: 7.5小時
- 蟲號: 822937
- 注冊: 2009-08-06
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-10-16 11:15:24
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2014-10-16 11:15:24
| 這個原因太多了。首先，要轉(zhuǎn)化進(jìn)入細(xì)胞之前，肯定是構(gòu)建含正確目標(biāo)序列的表達(dá)載體。怎么驗(yàn)證你的表達(dá)載體構(gòu)建正確了？酶切，測序，PCR擴(kuò)增等方法。這些都沒有問題嗎？如果一切OK，那么就考慮是否是要轉(zhuǎn)化的細(xì)胞沒有處理好感受態(tài)，根本就沒轉(zhuǎn)進(jìn)去呢？轉(zhuǎn)化后的培養(yǎng)，相比也設(shè)置了，陰性對照（空的轉(zhuǎn)化細(xì)胞），陽性對照（含空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化細(xì)胞），以及含有你表達(dá)序列的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。三種同時培養(yǎng)，都有細(xì)胞篩選出來嗎？后期驗(yàn)證的時候，當(dāng)然也是要陽性對照和目的條帶一起PCR驗(yàn)證了。涉及到的操作步驟較多，試劑也多，建議還是要仔細(xì)審查每一步驟，確保每一步操作都正確吧。 |
3樓2014-10-14 11:23:05
2樓2014-10-14 10:34:39
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時
- 蟲號: 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2014-10-14 11:34:17
HX91926
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 509.6
- 散金: 90
- 帖子: 268
- 在線: 39.3小時
- 蟲號: 2866823
- 注冊: 2013-12-12
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2014-10-15 21:20:19
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +8 | PolarBear11 2026-03-26 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 雨清天晴 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +11 | junqihahaha 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +5 | 李嘉圖·S·路 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +5 | 1() 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4 | Higraduate 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績338 +4 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +3 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請] 請教下大家 2026年國家基金申請是雙盲審嗎？ +3 | lishucheng1 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +4 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|