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田甜思新蟲 (初入文壇)
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[求助]
pET-30a(+)不表達
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| 一直在做pET-30a(+)這個載體，但是不表達，我是在37度下培養(yǎng)的，都是在OD600=0.6-0.7之間加IPTG的，但就是不表達，質(zhì)粒測序是正確的。各位幫忙解決下。謝謝！ |
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cicelyzh
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2樓2013-03-13 00:38:15
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4樓2013-03-13 10:51:00
【答案】應(yīng)助回帖
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以下幾點僅供參考： 1，有沒有加翻譯起始密碼子， 2，是不是要表達的蛋白很大，很大的話，不易表達， 3，你怎么知道你得蛋白沒表達，你用的事什么標(biāo)簽檢測的，有時候光憑借IPTG誘導(dǎo)前后蛋白表達量的變化作為鑒定指標(biāo)并不是很可靠。 4，建議可以在你的蛋白前面加個GST標(biāo)簽引導(dǎo)表達，雖然沒有什么依據(jù)，對于某些蛋白可以起到增加表達的作用。 5，就像我以前解答另一個求助的一樣，蛋白不表達時，也有可能是稀有密碼子導(dǎo)致的。 |
5樓2013-03-13 11:19:32
lidonghong
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7樓2013-03-13 16:43:00
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8樓2013-03-13 16:44:49
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9樓2013-03-14 10:52:29
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10樓2013-03-14 21:55:11
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