 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1843 | 回復(fù): 7 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
[求助]
蛋白表達可不可能存在內(nèi)含肽剪接
|
||||
| 最近使用大腸桿菌大量表達一種細菌的細胞色素c。但是western驗證的時候發(fā)現(xiàn)大小錯誤。同表達的其他細胞色素C都很正常，所以懷疑是不是有可能存在內(nèi)含肽剪接�；蛘哂衅渌赡�？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有200人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 蛋白表達不出來，是什么原因造成的
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 細菌蛋白酶序列
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 蛋白質(zhì)功能表達和功能驗證
已經(jīng)有4人回復(fù)
- pET-30a(+)不表達
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 肽圖能決定蛋白的幾級結(jié)構(gòu)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【資料】ELISA、western blot、抗體、蛋白、核酸、免疫熒光等·pierce公司實驗手冊
已經(jīng)有288人回復(fù)
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 分析的很全面了哈 2012-05-25 13:52:51
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 分析的很全面了哈 2012-05-25 13:52:51
|
蛋白質(zhì)內(nèi)含子剪切（protein cleavage）和剪接（protein splicing)都是有可能的，protein cleavage一般是由其他蛋白酶作用產(chǎn)生的，只是切不連接，protein splicing則不需要其他酶或者蛋白質(zhì)作用，發(fā)生protein splicing的多肽自己就可以進行既切掉多肽序列中的一段或幾段序列(inteins)又把剩下的序列重新連接在一起，而且重新連接的片段有時還會發(fā)生重排，比如伴刀豆蛋白不僅剪切掉中間一段序列，而且其原先的N-末端和C-末端序列，即所謂的exteins，彼此相對位置會發(fā)生交換，N-末端成為了成熟蛋白質(zhì)的C-末端序列，C-末端成為了成熟蛋白質(zhì)的N-末端序列。這樣的protein splicing首先是有蛋白質(zhì)的本身的一級和空間結(jié)構(gòu)決定的。 閱讀框改變，肯定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)就完全不同了。 還有是發(fā)生了RNA editing，這時可能會有終止密碼改變或者中間的編碼改變而引起蛋白質(zhì)序列改變，進而引起蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)改變。 蛋白質(zhì)降解也是必須考慮的一個問題，這與表達的工程細胞中的蛋白酶有關(guān)，可以考慮使用分泌表達或者共表達。 Translational Hopping，及翻譯時發(fā)生核糖體跳讀，在同一條mRNA中有些密碼子不翻譯，這樣的情比較少見�？赡芘cmRNA形成二級結(jié)構(gòu)或者密碼子稀有性相關(guān)，如果是大腸桿菌，可能在營養(yǎng)極度缺乏時的應(yīng)急反應(yīng)也有關(guān)系。 不管什么原因，檢測起來不難，首先做個表達的蛋白質(zhì)的N-末端與C--末端，降解和提前終止或者不正常起始翻譯一般都可以檢測出來，再用同種酶同樣條件下切割表達的蛋白質(zhì)和正常的蛋白質(zhì)標準品，然后分別走個電泳，可以比較出序列大致差異在何處，即肽譜分析。 |
4樓2012-05-25 11:21:28
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時
- 蟲號: 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 辛苦辛苦 2012-05-25 13:52:18
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 辛苦辛苦 2012-05-25 13:52:18
|
內(nèi)含肽剪接這種現(xiàn)象是有的，如NEB公司的IMPACT System，利用的就是內(nèi)含肽切除標簽。 Chong S, Mersha FB, Comb DG,et al.Single-column purification of free recombinant proteins using a self-cleavable affinity tag derived from a protein splicing element [J]. Gene. 1997 192(2):271-81. |
2樓2012-05-25 10:44:27
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時
- 蟲號: 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2012-05-25 10:45:58
mlanqiang
木蟲之王 (文學(xué)泰斗)
藍博士
- 應(yīng)助: 3409 (副教授)
- 金幣: 55278.8
- 散金: 5498
- 紅花: 62
- 帖子: 73916
- 在線: 730.8小時
- 蟲號: 302202
- 注冊: 2006-12-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 膠體與界面化學(xué)
5樓2012-05-25 12:21:16
6樓2012-05-26 00:57:38
7樓2012-05-26 00:58:56
ganchao1776
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 12
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 11223.1
- 散金: 1811
- 紅花: 30
- 帖子: 3399
- 在線: 900.8小時
- 蟲號: 330935
- 注冊: 2007-03-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2012-05-27 22:15:24
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 593318518 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[教師之家] 焦慮 +8 | 水冰月月野兔 2026-03-13 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[基金申請]
今年的國基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +10 | 小樓。 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識可樂 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600調(diào)劑求老師收留 +9 | jiaanl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8 | 困于星晨 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 270求調(diào)劑 085600材料與化工專碩 +3 | YXCT 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑，材料、化工皆可 +8 | 蘇打水7777 2026-03-11 | 10/500 |
|