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shenxing325銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
急！蛋白截短表達(dá)不成功~
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情況是這樣的：我本來要表達(dá)一個(gè)蛋白，但是由于比較大，不容易表達(dá)（也是沒做出來 ），因此我就選N末端（疏水性）進(jìn)行表達(dá)。因?yàn)檫@一段前面還有信號(hào)肽，因此把這一段截出來的話我就人為在前面加上ATG以及在后面加上TGA�，F(xiàn)在經(jīng)過測(cè)序已經(jīng)正確的連接到表達(dá)載體上了，但是還是沒有表達(dá)（用SDS-PAGE作為檢測(cè)手段），各位有做過蛋白截短表達(dá)嘛？請(qǐng)幫忙找一下原因，謝謝�。∫沧隽吮容^久了，各位幫幫忙~~ |
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2樓2011-11-13 20:31:54
kokia
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3樓2011-11-13 22:09:13
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4樓2011-11-14 09:00:47
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6樓2011-11-15 08:50:30
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7樓2011-11-18 10:23:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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wanhscn(金幣+2): Good！鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-11-18 19:27:27
shenxing325(金幣+20): 因?yàn)槲覍?shí)驗(yàn)室里只有我一個(gè)人做這個(gè)方面更，其他人都不相關(guān)，所以自己摸索得還不夠，可以和你繼續(xù)交流嗎？你提供的信息對(duì)我很重要，謝謝！ 2011-11-19 10:38:05
wanhscn(金幣+2): Good！鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-11-18 19:27:27
shenxing325(金幣+20): 因?yàn)槲覍?shí)驗(yàn)室里只有我一個(gè)人做這個(gè)方面更，其他人都不相關(guān)，所以自己摸索得還不夠，可以和你繼續(xù)交流嗎？你提供的信息對(duì)我很重要，謝謝！ 2011-11-19 10:38:05
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我看樓主的專業(yè)像是做蛋白結(jié)構(gòu)的，我和你也算是同行。我們實(shí)驗(yàn)室做截短表達(dá)從來都不是像你這樣只做一個(gè)。 有些蛋白很難獲得可溶性表達(dá)，所以通常采用的就是truncation。對(duì)于一些我們真正感興趣的蛋白，為了篩到可溶性表達(dá)，我們都是幾個(gè)氨基酸殘基這樣一步一步截短，做不同的N,C端截短組合，幾百個(gè)克隆這樣做。我還沒聽說過樓主這樣的截短策略——盯住一個(gè)。 另外，在做截短之前需要對(duì)自己的蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)做很多判斷，比如存不存在disorder，哪些domain是真正重要的等等。 最后祝你試驗(yàn)順利。 |
8樓2011-11-18 12:49:13
AnkeyGO
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9樓2011-11-18 18:44:53
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