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田甜思新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
pET-30a(+)不表達(dá)
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| 一直在做pET-30a(+)這個(gè)載體，但是不表達(dá)，我是在37度下培養(yǎng)的，都是在OD600=0.6-0.7之間加IPTG的，但就是不表達(dá)，質(zhì)粒測(cè)序是正確的。各位幫忙解決下。謝謝！ |
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4樓2013-03-13 10:51:00
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-03-13 20:29:17
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-03-13 20:29:17
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以下幾點(diǎn)僅供參考： 1，有沒(méi)有加翻譯起始密碼子， 2，是不是要表達(dá)的蛋白很大，很大的話(huà)，不易表達(dá)， 3，你怎么知道你得蛋白沒(méi)表達(dá)，你用的事什么標(biāo)簽檢測(cè)的，有時(shí)候光憑借IPTG誘導(dǎo)前后蛋白表達(dá)量的變化作為鑒定指標(biāo)并不是很可靠。 4，建議可以在你的蛋白前面加個(gè)GST標(biāo)簽引導(dǎo)表達(dá)，雖然沒(méi)有什么依據(jù)，對(duì)于某些蛋白可以起到增加表達(dá)的作用。 5，就像我以前解答另一個(gè)求助的一樣，蛋白不表達(dá)時(shí)，也有可能是稀有密碼子導(dǎo)致的。 |
5樓2013-03-13 11:19:32
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